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SDS-PAGE蛋白胶银染注意事项

2009-11-27  飞絮620

SDS-PAGE蛋白胶银染注意事项

Update:2009-03-15From:ibioo.Com Hot: 421

  

银染注意事项:

1. 银染主要出现在胶的表面,用薄胶(0.5-0.75mm)可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。乙酸会干扰银染,因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度银染,可用Rapid Fix脱色,并用考马斯亮蓝二次染色。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程操作中都应带手套。
6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底,或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
9. 在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些干扰性物质。
10. 室温操作,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。
11. 当蛋白质中含有核酸或金属时,银染则不会奏效。改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以改进染色效果。
12. SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。减少巯基乙醇的用量即可避免。
13. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
14. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。
15. 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。

以上内容,摘自汪家政 范明 主编的《蛋白质技术手册》,详细内容请参考该书P92-96.

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