实验器材和药品 器材:电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
1、大量元素母液的配制 各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取,用蒸馏水分别溶解,按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶,贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时,每配1L培养基取此液100ml。 表1 MS培养基大量元素母液制备
注意: 2、微量元素母液的配制 MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成。微量元素用量较少,特别是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ,因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2,表3配方,用电光天平称量,其它同大量元素。配制培养基时,每配制1L培养基,取微量Ⅰ10ml,微量Ⅱ0.1ml。 表2 MS培养基微量Ⅰ的配制
表3 MS培养基微量Ⅱ的配制
注意: 3、铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液,如柠檬酸铁,只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物,必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便,又比较稳定,不易发生沉淀。配制方法同上,直接用蒸馏水加热搅拌溶解,定容至1L。配制培养基时,配制1L取此液10ml。 表4 MS铁盐母液的配制
注意: 4、有机母液的配制 MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解,定容至1L,注意称量时用电子分析天平。配制培养基时,每配1L培养基取此液5ml。 注意: 表5 MS培养基有机物质母液的制备
5、激素母液配制 植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好,需要注意的是: (1)配制生长素类,例如IAA、NAA、2.4-D、6BA,应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解,或者用 1mol/L的NaOH溶解,然后用蒸馏水定容到一定的浓度。 (2)细胞分裂素,例如KT,应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解,再用蒸馏水定容。 (3)配制生物素,用稀氨水溶解,然后定容。 注意: MS基本培养基大量成分1 (mg/l) 化学成分 含量 扩大倍数 母液称量 定容 吸取量 硝酸钾(KNO3) 1900 50 95 g 硝酸铵(NH4NO3) 1650 50 82.5 g 1000 ml 20ml/l 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 370 50 18.5 g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 170 50 8.5 g MS基本培养基大量成分2 (mg/l) 化学成分 含量 扩大倍数 母液称量 定容 吸取量 氯化钙(CaCl2.2H2O)* 440 50 22 g 1000ml 20ml/l *如果是CaCl2,母液称量16.608 g MS基本培养基微量成分1(mg/l) 化学成分 含量 扩大倍数 母液称量 定容 吸取量 硫酸锰(MnSO4.4H2O)* 22.3 100 2.23 g 硫酸锌(ZnSO4.4H2O) 8.6 100 0.86 g 硼酸(H3BO3) 6.2 100 0.62 g 碘化钾(KI) 0.83 100 0.083 g 1000ml 10ml/l 钼酸钠(Na2MoO4.2H2O) 0.25 100 0.025 g 硫酸铜(CuSO4.5H2O) 0.025 100 0.0025 g 氯化钴(CoCl2.6H2O) 0.025 100 0.0025 g *如果是MnSO4.H2O,母液称量16.9 g。 MS基本培养基微量成分2: 铁盐 (mg/l) 化学成分 含量 扩大倍数 母液称量 定容 吸取量 硫酸亚铁(FeSO4.7H2O) 27.8mg/l 100倍 2.78 g Na2-EDTA 37.3mg/l 100倍 3.73 g 1000ml 10ml/l MS基本培养基有机成分 (mg/l) 化学成分 含量 扩大倍数 母液称量 定容 吸取量 甘氨酸 2.0 100 0.2 g 盐酸硫胺素(Thiamine HCl)或VB1 0.1 100 0.01 g 盐酸吡哆醇(Pyridoxine HCl)或VB6 0.5 100 0.05 g 1000ml 10ml/l 烟酸(Nicotinic acid) 0.5 100 0.05 g 肌醇(Inositol) 100 100 10 g |
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来自: bengua1985 > 《专业》