珠蚌软体中小分子活性物质的研究

南京中医药大学硕士论文

珠蚌软体中小分子活性物质的研究

姚静倩  

【摘要】： 本论文来源于江苏省高新技术产业化课题《江苏地产蚌类资源深加工产品的研究开发》,编号:JHB05-26。珠蚌具有丰富的营养成分和良好的药用价值。本实验室前期实验主要对珠蚌软体多糖及其活性进行了深入研究。本课题旨在研究珠蚌除多糖及蛋白质等大分予以外的小分子活性物质。从珠蚌水提醇沉上清液的成分分离鉴定及其活性筛选入手,对珠蚌水提醇沉上清液浸膏及其石油醚、正丁醇萃取物进行了成分与活性研究。 本论文的主要研究内容包括以下几个部分: 1.文献研究 查阅有关珠蚌的研究文献,了解珠蚌的历史沿革和现代研究进展。查阅有关淡水及海洋贝类的文献,了解贝类主要可能含有的物质及其生物活性,为实验设计和实验内容奠定文献资料基础。 2.珠蚌水提醇沉上清液部分的成分定性鉴别 根据前期成熟完善的工艺路线和操作步骤,从珠蚌软体中提取多糖后的水提醇沉上清液浸膏入手,对水提醇沉上清液进行成分的预试验研究。结果发现:石油醚萃取部分含有油脂和甾类物质,正丁醇萃取部分主要含有甾类物质、糖苷类、生物碱类、有机酸类物质,水残留液中主要有氨基酸、糖类物质等。 3.珠蚌水提醇沉上清液浸膏的活性筛选 根据古籍记载,珠蚌水煎液具有“解热毒,托斑疹,解痘毒”的功效,故活性研究首先从抗炎实验入手。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和棉球肉芽肿实验来观察珠蚌水提醇沉上清液的抗炎作用。结果证明珠蚌水提醇沉上清液对小鼠耳廓肿胀、小鼠棉球肉芽肿的形成均有明显的抑制作用。说明珠蚌水提醇沉上清液中含有具有抗炎活性的小分子物质。将水提醇沉上清液通过分别用石油醚和正丁醇萃取,分成石油醚层、正丁醇层和萃取后水层,继续进行有效部位筛选。珠蚌水提醇沉上清液中石油醚、正丁醇萃取部位对小鼠耳廓肿胀、小鼠棉球肉芽肿的形成均有明显的抑制作用,说明这两个部位含有抗炎活性物质。 4.珠蚌石油醚萃取部位成分的研究 通过前期实验,发现石油醚萃取部位有明显的抗炎活性,故对该部位成分进行进一步研究。将该部位浸膏采用硅胶柱层析分离,以石油醚-乙酸乙酯不同配比梯度洗脱,分离得到脂肪酸部分和甾醇部分。通过GC-MS技术对珠蚌脂肪酸的组成进行了分析,共鉴定出14种脂肪酸,其中饱和脂肪酸8种,主要为十六烷酸(软脂酸)、十七烷酸、十八烷酸(硬脂酸)等,占脂肪酸总量的29.24%。含不饱和脂肪酸6种,主要有9-十六碳烯酸、9-十八碳烯酸(油酸)、9,12-十八碳二烯酸(亚油酸)、5,8,11,14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)等,占总量的42.59%,明显高于饱和脂肪酸。从石油醚萃取部位得到珠蚌甾醇,继续分离获得的样品,经碳氢等色谱、光谱分析表明该甾醇为混合物。 4.珠蚌石油醚萃取部位的脂肪酸类和甾醇类物质抗炎活性研究 通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和珠蚌甾醇对小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子释放影响实验,发现珠蚌甾醇类物质对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,而脂肪酸则无明显作用。珠蚌甾醇在浓度为50ug/mL、25ug/mL和12.5ug/mL均能显著抑制脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞释放No、TNF-α及IL-1等细胞炎性因子。 5.珠蚌中核苷类物质的研究 前期实验从正丁醇浸膏中检测到尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷及胸腺嘧啶,论文从珠蚌中检测到核苷类物质并对五种主要成分进行了含量测定。以珠蚌中各核苷含量的比例进行配伍,通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、小鼠棉球肉芽肿实验来观察核苷的抗炎作用。结果表明珠蚌中所含的核苷对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀与小鼠棉球肉芽肿的形成都具有明显的抑制作用。说明核苷类成分为珠蚌水提醇沉上清液正丁醇部位浸膏的抗炎活性成分之一。 研究结果表明珠蚌软体水煎液除去大分子物质后的上清液中具有抗炎活性的主要物质为甾醇类和核苷类。

【关键词】：小分子物质 抗炎活性 甾醇 脂肪酸 核苷
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R284.1
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2009.252003
【目录】：

·                            中文摘要6-8

·                            英文摘要8-11

·                            引言11-12

·                            第一部分 文献研究12-25

·                            第一章 双壳贝类活性物质研究进展12-20

·                            参考文献17-20

·                            第二章 珠蚌的研究进展20-25

·                            参考文献23-25

·                            第二部分 实验部分25-74

·                            第三章 珠蚌水提醇沉上清液的成分研究25-28

·                            1 珠蚌多糖与水提醇沉上清液浸膏的制备25-27

·                            2 成分预试验27-28

·                            第四章 珠蚌水提醇沉上清液浸膏的活性筛选28-36

·                            1 珠蚌水提醇沉上清液浸膏的抗炎作用研究28-31

·                            2 珠蚌水提醇沉上清液浸膏抗炎活性部位的筛选31-35

·                            参考文献35-36

·                            第五章 珠蚌石油醚萃取物的成分研究36-44

·                            1 珠蚌石油醚萃取物的提取分离与成分鉴定36-39

·                            2 珠蚌脂肪酸的成分分析39-43

·                            参考文献43-44

·                            第六章 珠蚌石油醚萃取物的抗炎活性研究44-55

·                            1 珠蚌石油醚萃取物的抗炎实验44-46

·                            2 珠蚌甾醇对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中炎症因子释放的影响46-53

·                            参考文献53-55

·                            第七章 珠蚌中核苷类物质的鉴定与含量测定55-69

·                            1 成分定性检测55-59

·                            2 三角帆蚌中核苷类物质的含量测定59-67

·                            参考文献67-69

·                            第八章 珠蚌中核苷类物质的抗炎作用研究69-74

·                            1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验69-71

·                            2 小鼠棉球肉芽肿试验71-73

·                            参考文献73-74

·                            结论74-76

·                            附录76-85

·                            攻读硕士学位期间取得的科研成果85-86

·                            致谢86

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