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基本内容
克氏双糖铁琼脂(换用方法) 成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。 关于肠道杆菌的纯培养： 由于KIA培养基含乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵和酚红指示剂。酚红在pH7.4时为红色，细菌分解糖产酸时则变为黄色。因此，底层穿死结中可以观察细菌动力，对葡萄糖发酵的能力及是否产生硫化氢；斜面可观察细菌对乳糖的发酵情况。肠道致病菌多不发酵乳糖，因此可以区别肠道内的致病菌和大肠埃希菌。
生化原理： 斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此配KIA或TSI时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长 度，两者均为3cm ，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。 用针穿刺时，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm处，然后在斜面上往复划线。放35度培养18-24小时。 观察结果：有三种类型 A.非发酵型：无碳氢化合物发酵，所以无酸产生，斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。 B.非乳糖发酵型:如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可以产酸。开始阶段，培养8-12h时，产生的酸 足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸，产生的 胺类很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整个斜面又转换成碱性PH，颜色有变成红色。深部（厌氧区域），氨基酸降解不足以中和形 成的酸，培养基仍为黄色。 C.乳糖（蔗糖）发酵型 1.KIA试验（克氏双糖鉄琼脂培养基试验）原理：KIA琼脂中含有乳糖浓度是葡萄糖的10倍，分解糖可产酸，使酚红指示剂变色；硫代硫酸钠可供给细菌产生硫化氢所需要的硫，铁盐可与硫化氢反应，生成黑色沉淀。 2.培养基：克氏双糖鉄琼脂培养基。 3.方法： 可疑菌落穿刺和斜面划线接种，35℃培养18～24h观察结果。 4.结果：碱性（K），酸性（A） K/K：不发酵碳水化合物，为不发酵菌特征。 K/A：葡萄糖发酵，乳糖不发酵，医|学教育网搜集整理如志贺菌。 K/A（黑色）：葡萄糖发酵，乳糖不发酵并产生硫化氢，如沙门菌。 A/A：葡萄糖和乳糖发酵，如大肠埃希菌和克雷伯菌属。
顺序：斜面(K/A)、底层(K/A）、产气（+/-)、H2S(+/-) 5.应用：主要用于革兰阴性杆菌，尤其是肠杆菌科细菌的鉴定。 |
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