1.30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】 将 【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。 一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。 在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。 2.40%丙烯酰胺 【配制方法】 把 【注意】 见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3.放线菌素D溶液 【配制方法】 把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于 【注意】 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。 4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液 【配制方法】 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于 5.10mol/L乙酸酰溶液 【配制方法】 把 6.10%过硫酸铵溶液 【配制方法】 把 7.BCIP溶液 【配制方法】 把 8.2×BES缓冲盐溶液 【配制方法】 用总体积90ml的蒸馏水溶解 9.1mol/L CaCl2溶液 【配制方法】 在200ml蒸馏水中溶解 【注意】 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至 10.2.5mol/L CaCl2溶液 【配制方法】 在20ml蒸馏水中溶解 11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液 【配制方法】 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解 【注意】 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液 【配制方法】 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于
比色杯光径为 13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】 在800ml水中加入 【注意】 EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。 14.溴化乙锭(10mg/ml溶液) 【配制方法】 在100ml水中加入 【注意】 小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。 15.2×HEPES缓冲盐溶液 【配制方法】 用总量为90ml的蒸馏水溶解 16.IPTG溶液 【配制方法】 IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解 17.1mol/L乙酸镁溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 18.1mol/L MgCl2溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 【注意】 MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如 19.β-巯基乙醇(BME)溶液 【配制方法】 一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于 【注意】 BME或含有BME的溶液不能高压处理。 20.NBT溶液 【配制方法】 把 21.酚/氯仿溶液 【配制方法】 把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层,保存于 【注意】 酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液 【配制方法】 用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于 【注意】 PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且 23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液 【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解 24.1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液 【配制方法】 将 25.乙酸钾溶液(用于碱裂解) 【配制方法】 在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。 26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液 【配制方法】 在80ml水中溶解 27.5mol/L NaCl溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液 【配制方法】 在900ml水中溶解 【注意】 SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。 29.20×SSC溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 30.20×SSPE溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 31.100%三氯乙酸溶液 【配制方法】 在装有 32.1mol/L Tris溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解 pH HCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml 应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至 【注意】 如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris。 尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。 Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高 33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris) 【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解 34.X-gal溶液 【配制方法】 X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于 杂交试验中用于降低背景的封闭剂
|
|