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食用富硒平菇菌丝生产因子筛选通过培养基种类、pH 值、硒浓度和平菇不同品种影响平菇菌丝体富硒量的研究，筛选出平菇菌丝体富 硒理想的条件为马铃薯葡萄糖液体培养基，添加浓度为7.5mg/L 的亚硒酸钠，pH 值7.0，平菇菌种选用P13，每 g 菌丝含硒量达到371.1μg。 关键词：平菇；富硒；培养条件 The Influence of Factors on Selenium Enrichment of Mycelium of Pleurotus ostreatus WEN Hai-xiang (Department of Food Engineering, Foshan University, Foshan 528231, China) Abstract：Studies have shown that selenium enrichment is optimal in the treatment: concentration of selenium is 7.5mg/L. pH7, liquid culture of PDA, the variety of Pleurotus ostrcatus P13, and content of selenium in mycelium of Pleurotus ostrcatus 371.1μg/g . Key words：Pleurotus ostrcatus；selenium enrichment；condition of culture 中图分类号：S646.14 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)09-0052-03 收稿日期：2005-09-23 作者简介：温海祥(1965-)，男，副教授，主要从事微生物学及食用真菌学的教学和科研工作。 硒(Se)具有防治疾病、抗衰老的作用，1973 年经世 界卫生组织专家委员会确定为人体必需的营养元素[1,2]。 但地球表面硒的含量很少，且分布不均衡，世界上4 0 多个国家和地区缺硒，我国有2 2 个省份缺硒，华北地 区缺硒尤其严重，全国有7 0 % 的人口生活在缺硒地区。 中国预防医学科学院研究成果表明，成年人每日硒需要 量最低为30～50μg ，幼儿减半；每日最大安全摄入量 为400μg[3]。目前用作人体硒补充来源的主要有亚硒酸 钠片及其强化食盐等无机药剂，人体吸收效率低，存在 一定的毒副作用，因此研制高效无毒副作用的硒药或富 硒食品，对防治缺硒疾病及提高机体抗病能力都有重要 作用。有关研究表明，生物源有机硒在生理、药理上 的功效都较无机硒优越，且对人体安全无毒副作用[4,5]。 目前， 富硒生物工程项目包括生物活性硒、富硒果汁、 富硒牛奶、富硒鸡蛋、富硒大蒜、富硒米、富硒肉等。 平菇(Pleurotus ostreatus )分类上属伞菌目 (Agaricales)，口蘑科(Tticholomataceae)，侧耳属 (Plearotus)[6]，是目前世界上已达到工业化生产规模的 五大食用菌之一[ 7 , 8 ]，品种资源丰富，适应性强，很少 受到地区条件的限制，是我国目前栽培面积最大的食用 菌之一[ 9 , 1 0 ] 。本实验通过筛选培养基、平菇菌种、p H 值和硒浓度等因子，在培养基中加入一定浓度的硒盐， 生产富硒平菇菌丝体，将无机硒转化为有机硒，为富 硒平菇菌丝体的开发应用奠定基础，富硒菌丝体产品有 着广阔的前景，如生产食品添加剂、佐料，利用菌丝 体发酵生产富硒饮料、酒、口服液等，也可通过提取 其生物活性物质，制备生物富硒药剂和营养剂等[ 1 1 ]。 1 材料与方法 1.1 培养基筛选 选择适合平菇生长的1 0 种培养基用于筛选，培养 基见表1[11,12]。取PDA 平板培养基上生长均匀、长势良 好的平菇菌丝块(d=1cm)分别接种到10 种固体培养基(硒 浓度为6mg/L)中央[13]及液体培养基中(200ml 三角瓶装量 50ml)，28℃条件下培养，观察菌丝的生长情况、密度、 直径等，液体培养置200r/min 摇床培养，观察菌丝的 生长情况、残液清亮度、菌丝形态等，7 d 后过滤收集 菌丝体，用清水洗数次，于6 0 ℃烘干至恒重，称重。 1.2 菌种筛选 选择常见平菇品种P368、P13、P40、P20、HP3、 P 2 6 、D 6 、P 3 2 、P 4 8 用于筛选。 取P D A 平板培养基上生长均匀、长势良好的9 个 品种的平菇菌丝块(d=1cm)分别接种到PDA 固体培养基 (硒浓度为6mg/L)中央及液体培养基中(200ml 三角瓶装量 ※基础研究食品科学2006, Vol. 27, No. 09 53 序号 配 方 1 马铃薯200g 葡萄糖20g 2 蛋白胨2g 葡萄糖20g 磷酸二氢钾0.46g 磷酸氢二钾1g 硫酸镁0.5g 3 麦芽糖20g 葡萄糖20g 蛋白胨1g 4 麦芽糖50g 蛋白胨0.3g 蔗糖40g 磷酸二氢钾0.3g 磷酸氢二钾0.3g 硫酸镁0.3g 5 马铃薯200g 蛋白胨2g 葡萄糖20g 磷酸二氢钾0.5g 硫酸镁0.5g 氯化钠1g 6 马铃薯200g 葡萄糖20g 磷酸二氢钾3g 硫酸镁1.5g 维生素B120mg 7 蛋白胨2g 葡萄糖20g 酵母膏2g 硫酸镁0.5g 磷酸二氢钾0.5g 磷酸氢二钾1g 维生素B120mg 8 马铃薯240g 蔗糖20g 硝酸钾10g 磷酸二氢钾5g 9 葡萄糖20g 蛋白胨2g 磷酸二氢钾0.5g 硫酸镁0.5g 氯化钙0.1g 维生素B1100mg 10 马铃薯淀粉40g 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾0.5g 注：加水至1000ml 配制成10 种液体培养基，另加琼脂20g 煮溶配制成 10 种固体培养基。 表1 10 种培养基配方 Table 1 Prescription of 10 sorts of media 50ml)，28℃条件下培养，观察菌丝的生长情况、密度、 直径等，液体培养置200r/min 摇床培养，观察菌丝的 生长情况、残液清亮度、菌丝形态等，7 d 后过滤收集 菌丝体，用清水洗数次，于6 0 ℃烘干至恒重，称重。 1.3 p H 筛选 制备pH 值为4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5 的 马铃薯葡萄糖液体培养基(亚硒酸钠浓度为6mg/L)，接 种等量平菇液体菌种，置200r/min 摇床、28℃条件下培 养，观察菌丝体的生长情况、残液清亮度、菌球形态 等，7d 后过滤收集菌丝体，用清水洗数次，于60 ℃烘 干至恒重， 称重。 1.4 硒浓度筛选 制备硒浓度为0 、3 、4.5、6 、7.5、9 、12mg/L 的马铃薯葡萄糖液体培养基，接种等量平菇液体菌种， 置200r/min 摇床、28℃条件下培养，观察菌丝体的生长 情况、残液清亮度、菌球形态等，7 d 后过滤收集菌丝 体，用清水洗数次，于6 0 ℃烘干至恒重，称重，用 邻苯二胺分光光度法[14]测定菌丝含硒量。 1.5 正交试验 每个因子优势水平参与四因素( 培养基、菌种、酸 碱度、硒浓度) 三水平的正交试验，筛选食用富硒平菇 菌丝生产因子组合。 2 结果与分析 2.1 培养基试验结果 1 0 种培养基试验结果见表2 。结果表明，平菇菌 丝在硒浓度为6mg/L 的培养基中能继续生长。经新复极 差统计方法[15]分析，10 种培养基中平菇的菌丝生长速度 有显著的差异，生长疏密度差异亦较大，在同样的培 养条件下，平菇在1 、5 、7 、1 0 号固体培养基上的生 长速度、菌丝密度、菌丝生长量均明显优于其他培养 基。平菇在1 、5 、10 号液体培养基上的生长速度、菌 丝密度、菌丝生长量均明显优于其他培养基。 2.2 菌种筛选结果 结果见表3。9 种平菇品种在硒浓度为6mg/L 的PDA 固体培养基和液体培养基中均能生长。经SAS 方差分析 软件(The SAS System for Windows)分析，菌丝的生长速 度和生长密度均有显著的差异。固体培养基中P 1 3 、 P3 68 、P 20 、D6 、H P3 的菌丝生长的直径较大，明显 优于其他培养基；液体培养基中P13、HP3、P32 的菌 丝生长量显著优于其余品种。 2.3 p H 值筛选结果 结果见图1。适宜pH 为7.0、6.5 和7.5，菌株生 长正常，菌丝生长量优于其余p H 梯度。 2.4 硒浓度的筛选 培养基中硒浓度对平菇菌丝生长和富硒量的影响结 果见表4 。结果表明，培养基中添加亚硒酸钠浓度从0 固体培养基菌落直径(cm) 液体培养基菌丝干重(g) 培养基 平均值 差异显著性 平均值 差异显著性 0.05 0.01 0.05 0.01 1 7.9 a A 114.5 b B 2 3.7 d D 25.7 cd C 3 3.8 d D 22.7 cd C 4 4.0 d D 31.7 c C 5 7.2 a A B 100.1 b B 6 6.9 ab A B C 13.6 cd C 7 5.7 c C 21.5 cd C 8 5.9 bc B C 21.5 cd C 9 4.1 d D 7.3 d C 10 6.9 ab A B C 702.2 a A 表2 10 种培养基的菌落直径及菌丝生长量 Table 2 Diameter and thickness of mycelium community in 10 sorts of solid media(cm) 固体培养基菌落直径(cm) 液体培养基菌丝干重(g) 菌种 平均值 差异显著性 平均值 差异显著性 0.05 0.01 0.05 0.01 P368 7.83 b B 0.150 d D P13 9 a A 0.628 a A P20 6.83 c C 0.109 ed D P40 4.83 e E 0.010 ed D H P 3 5.17 e E 0.524 b B P32 7.5 b B C 0.386 c C P48 4.5 f E 0.132 ed D P26 3.83 g F 0.152 d D D 6 6 d D 0.094 d D 表3 9 种菌种的菌落直径和菌丝生长量 Table 3 Diameter(cm) and thickness of mycelium community in 9 varieties of Pleurotus ostrcatus 54 2006, Vol. 27, No. 09 食品科学※基础研究 到4.5mg/L 时，能促进菌丝的生长，在4.5 到7.5mg/L 时 生长稍受抑制，且在7 .5 m g /L 的处理中菌丝富硒量最 大，干菌丝富硒量达364.6μg/L。但当亚硒酸钠浓度达 到9mg/L 菌丝生长开始放慢。在12mg/L 的处理中菌丝 生长极为缓慢，明显受到抑制。 2.5 正交试验 平菇富硒菌丝培养基、菌种、酸碱度、硒浓度四 因子按正交试验表[16]L9(34)进行四因素三水平正交试验， 正交试验表见表5 。正交试验结果见表6 。经SA S 方差 0.2 0.15 0.1 0.05 0 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 菌丝干重(g) pH 值 0.0523 0.0658 0.0852 0.0918 0.1368 0.1464 0.1307 图1 pH 值对菌丝培养的影响 Fig.1 Effects of pH value to mycelium of Pleurotus ostrcatus 培养基中亚硒酸钠 浓度(mg/L) 0 3 4.5 6 7.5 9 12 菌丝干重(g) 0.3447 0.4522 0.4604 0.4217 0.4118 0.3313 0.2324 干菌丝富硒量 (μg/g) 0.00 129.8 192.8 301.6 364.6 350.1 282.0 表4 硒浓度对平菇菌丝生长和富硒量的影响 Table 4 Effects of concentration of selenium to growth and selenium enrichment of mycelium of Pleurotus ostrcatus 处理 列号 组合号1(培养基) 2(菌种) 3(酸碱度) 4(硒浓度) 1 (1) P32 6.5 6 2 (1) P13 7 7.5 3 (1) H P 3 7.5 9 4 (5) P32 7 9 5 (5) P13 7.5 6 6 (5) H P 3 6.5 7.5 7 (10) P32 7.5 7.5 8 (10) P13 6.5 9 9 (10) H P 3 7 6 表5 平菇培养基、菌种、酸碱度、硒浓度四因素三水平 正交试验表L9(34) Table 5 The orthogonal test of L9(34) 分析软件(The SAS System for Windows)分析，四因素三 水平正交试验不同组合间平菇菌丝干重及菌丝含硒量均 有显著的差异，其中第2 号组合，即1 号培养基( 马铃 薯葡萄糖液体培养基) ，菌种P 1 3 ，酸碱度7 ，硒浓度 7.5mg/L，平菇富硒能力最强，达到371.1μg/g。 3 结论 综合分析各因素对平菇菌丝体富硒效果的影响，表 明平菇富硒菌丝的生长和富硒能力与培养基种类、平菇 品种、酸碱度和硒浓度都有密切的关系，选用在酸碱 度为7，硒浓度为7.5mg/L 的马铃薯葡萄糖液体培养基， 通过振荡培养平菇菌种P13，可获得生长良好的平菇菌 丝，菌丝平均含硒量可达到371.1μg/g。 参考文献： [1] WHO Tech Rep Se No532[R]. 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