基因工程问答(2)

1。如何从基因文库中查找到目的基因？

用DNA探针从基因文库中准确提取目的基因，由于DNA双链的核苷酸序列是彼此互补的，当DNA分子杂交时，首先是双链解开（该过程称为变性），根据所需基因的核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成为探针。用这一探针探查基因文库中已经变性的DNA片段，如果有一个DNA片段能和探针片段互补结合而成双链（分子杂交），这一片段即含有所需要的基因。
从基因文库中找所需要的目的基因，就是要根据目的基因的有关信息，例如，根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因翻译产物蛋白质等特性来获取目的基因。此法较为复杂。
  如果把基因文库看作一座图书馆，那么目的基因就是一本你感兴趣的书，你想从图书馆中借出来。上面回答的是借书的流程，而现在的补充问题则属于借书前的工作。
  如果你只是说要借一本书，却不知道书名、作者、出版社、里面的人物和情节等所有内容，那么纵使有通天的本领，也不可能把这本书从图书馆里帮你调取出来。
  回到基因文库和目的基因上来，既然是目的基因，那么，对这个基因其实是有一定程度了解的，只是我们手里没有实物。我们要做的不仅是把它调取出来，而是在调取后拿它去做后续工作，这才是重要的。就像借了书要读一样。核苷酸序列信息就相当于书名。如果不知道，你需要能通过其他途径去查询获取。就像通过小说主人公的名字去查得书名最后借到书一样。

2。为何不将重组的Ti质粒直接导入到植物细胞？

将目的基因导入受体细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。Ti质粒太大不便于操作，所以往往将T-DNA用限制酶从Ti质粒上切下，将它插入到一个细菌质粒中进行扩增。将外源植物DNA插入到T-DNA中，并在大肠杆菌中扩增，然后将此重组DNA引入含有完整Ti质粒的土壤杆菌中，通过Ti质粒上的T-DNA现带有外源基因工程的T-DNA之间的同源重组，将后者引入到Ti质粒中，最后通用经过转化的土壤杆菌去感染植物。带有冠瘿的植物即发生转化。也可以用Ti质粒直接使植物学细胞质原生质体发生转化。但转化的频率要低得多。Ti质粒只适合于双子叶植物学和少数几种单子叶植物，还不能适用于逐步形成有经济价值的谷类作物的基因工程工作。