摘要:本试验选用240头健康、体重相近(11.64 ± 0.37 kg)的断奶仔猪。采用单因子完全随机设计，分为抗生素组、试验一组、试验二组、试验三组共4个处理组(公母各半)。每组肽生素(商品名，主要成份为天蚕素抗菌肽)加入量不同。试验期为28天。试验结果显示，一组、二组和三组在饲料转化率上比抗生素对照组分别降低了18.29%、7.93%和14.02%，其中一组的效果最好(P < 0.01)。因此通过本实验可判断，在仔猪日粮中添加250 mg/kg的肽生素制剂可显著改善饲料转化率，降低饲料成本，还不影响日增重，证明了肽生素在提高断奶仔猪生长性能上的独特优势。
关键词：天蚕素抗菌肽断奶仔猪 生长性能
天蚕素抗菌肽是生物防御系统产生的一类对抗外源性病原体的肽类物质，具有抗细菌、真菌、霉菌、病毒、原虫、癌细胞等多种活性，且不易产生耐药性，具有广阔的应用前景[1]。李国栋等[2]，经过试验证明部分含有核心标准螺旋结构的序列,对革兰氏阳性菌和阴性菌的最小抑菌浓度仅是原有cecropin A1抗菌肽的1/100左右.该类抗菌肽有希望进一步开发为新的抗感染药物。万遂如等[3]，在兽医临床实践中证明，抗菌肽对动物疾病有良好的防治效果。并在猪病防治中起到良好的效果。天蚕素抗菌肽最早由瑞典科学家Boman[5]等于1980年用阴沟通杆菌及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹后发现的该物质，研究发现，其不但具有光谱抗菌效果，而且对病毒、真菌、肿瘤等都具有一定的杀伤作用。天蚕素抗菌肽也是迄今研究最彻底，效果最明显的一类抗菌肽。
本公司经过专家学者的潜心研究，肽生素(主要成分天蚕素抗菌肽)是人工设计合成并在枯草芽孢杆菌中成功表达的基因工程产物[4]。体外试验已证明它能有效的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙氏菌等有害菌。并且，肽生素制剂无毒副作用，畜禽体内无有害残留，符合绿色环保食品的发展方向，迎合国内外市场的需要，是发展绿色饲料添加剂的理想途径。因此，它成为抗生素替代物的绝佳选择之一。
2 材料与方法
2.1试验动物和材料
试验选用240头初始体重11.64±2.30 kg的杜×大×长(Duroc × Landrace × Yorkshire)健康断奶仔猪进行试验。
2.2试验地点及试验时间
试验地点：湖南长沙某大型一条龙企业
试验时间：2010年5月20日至2010年6月17日
2.3试验设计与日粮
试验选用的猪按体重相近、遗传基础相似的原则，完全随机分为4个处理，每处理6重复，每重复(圈)10头猪(公、母各半)，实验设计为：对照组，即抗生素组(基础日粮 + 200 mg/kg 10%的硫酸抗敌素 + 1000 mg/kg 10%的杆菌肽锌);试验一组(基础日粮 + 250 mg/kg的肽生素);试验二组(基础日粮 + 500 mg/kg的肽生素);试验三组(基础日粮 + 750 mg/kg的肽生素)。由专人管理与记录，其它日常管理按正常进行。试验采用玉米-豆粕型基础日粮，参照NRC(1998)猪营养需要量标准配制猪试验基础日粮及预混料。试验基础日粮配方及营养水平如表1所示，各试验组日粮的4%预混料配方见表2，肽生素由北京中农颖泰生物技术有限公司提供。
表1 基础日粮配方及营养水平
firstrow: yes;">
lastrow: yes;">
|
原料（％） |
含 量 |
营养水平 |
含 量 |
|
玉米 |
33.5 |
CP，％ |
19.71 |
|
膨化玉米 |
26 |
DE，Mcal/kg |
3.39 |
|
去皮豆粕 |
12 |
Lys, % |
1.37 |
|
膨化全脂大豆 |
12 |
Met, % |
0.43 |
|
乳清粉 |
5 |
Thr, % |
0.91 |
|
大豆浓缩蛋白 |
2.5 |
Trp, % |
0.25 |
|
鱼粉 |
5 |
Ca, % |
0.8 |
|
4％Premix |
4 |
P, % |
0.6 |
|
共计 |
100 |
|
|
表2、4%预混料配方
|
仔猪 4％预混料 |
对照组
(g/kg ) |
试验一组
(g/kg ) |
试验二组
(g/kg ) |
试验三组
(g/kg ) |
|
五水硫酸铜 |
25 |
25 |
25 |
25 |
|
一水硫酸锌 |
9.85 |
9.85 |
9.85 |
9.85 |
|
一水硫酸亚铁 |
10.80 |
10.80 |
10.80 |
10.80 |
|
一水硫酸锰 |
2.6 |
2.6 |
2.6 |
2.6 |
|
碘酸钙 |
5 |
5 |
5 |
5 |
|
亚硒酸钠 |
5 |
5 |
5 |
5 |
|
50％氯化胆碱 |
15 |
15 |
15 |
15 |
|
10％硫酸抗敌素 |
5 |
0 |
0 |
0 |
|
10%杆菌肽锌 |
25 |
0 |
0 |
0 |
|
天蚕素 |
0 |
6.25 |
12.5 |
18.75 |
|
抗氧化剂 |
7.5 |
7.5 |
7.5 |
7.5 |
|
复合维生素 |
6 |
6 |
6 |
6 |
|
乳香剂 |
10 |
10 |
10 |
10 |
|
甜味剂 |
10 |
10 |
10 |
10 |
|
氧化锌 (前两周) |
75 |
75 |
75 |
75 |
|
磷酸氢钙17%p,21%Ca |
212.5 |
212.5 |
212.5 |
212.5 |
|
石粉 |
207.5 |
207.5 |
207.5 |
207.5 |
|
食盐 |
75 |
75 |
75 |
75 |
|
L-LYS,98% |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
DL-Met,98% |
15 |
15 |
15 |
15 |
|
L-Thr,98% |
37.5 |
37.5 |
37.5 |
37.5 |
|
麦饭石 |
190.75 |
214.5 |
208.25 |
202 |
|
共计 |
1000 |
1000 |
1000 |
1000 |
2.4饲养管理
试验猪饲养在封闭式保育猪舍内，水泥地面、漏逢地板各半，通风良好。试验期间每天上午和下午各加料一次，自由采食和饮水，按猪场常规程序进行消毒、驱虫和免疫。
2.5 检测指标和方法
生长性能指标: 分别于试验开始和结束时早晨空腹逐只称个体体重，以重复(圈)为单位记录耗料量，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和饲料转化率(FCR)。腹泻率:每天观察仔猪排粪情况，每天上午、傍晚逐头检查仔猪肛门，观察有无粪便污染及红肿并做好记录。腹泻频率、腹泻指数反映了腹泻的严重程度。
2.6 日粮成分分析
试验日粮水分、粗蛋白、粗纤维、钙、磷等成分按照AOAC(1990)方法进行测定。
2.7 数据分析
实验数据采用SAS统计，进行方差分析，差异显著则进行Duncan’多重比较。
3 结果
试验仔猪采食量、日增重和饲料转化率如表3所示。试验初始的各组体重差异不显著(P = 0.99)，试验全期平均日增重试验各组相对于抗生素组均有改善趋势，但差异均不显著(P > 0.05)。但从各指标的趋势上看，添加肽生素的试验组的表现优于抗生素对照组。与抗生素对照组相比，饲料转化率则有明显的改善。试验一组、试验二组和试验三组在饲料转化率上比抗生素对照组分别降低了18.29%、7.93%和14.02%，均表现出显著差异，其中尤以试验一组的效果最好(P < 0.01)。各组之间日采食量之间差异不显著(P = 0.291)。试验一组、试验二组和试验三组的采食量均比抗生素对照组降低了14.29%、7.69% 和8.79%，数据统计无显著差异。这证明试验组的仔猪在不影响日增重的情况下减少了采食量，有效降低生产成本。
表3 肽生素肽对断奶仔猪生产性能的影响
|
处理 |
对照组组 |
试验一组 |
试验二组 |
试验三组 |
SEM |
P-value |
|
始重IBW, kg |
11.6 |
11.74 |
11.61 |
11.6 |
0.37 |
0.999 |
|
末重BW, kg |
27.15 |
28.17 |
27.3 |
28.16 |
0.77 |
0.952 |
|
ADG, kg |
0.56 |
0.59 |
0.56 |
0.59 |
0.02 |
0.807 |
|
ADFI, kg |
0.91 |
0.78 |
0.84 |
0.83 |
0.02 |
0.291 |
|
FCR |
1.64A |
1.34C |
1.51B |
1.41C |
0.03 |
<0.001* |
|
腹泻率，% |
5.24a |
3.53b |
2.46b |
1.87c |
0.89 |
0.045 |
注：不同大写字母表示差异极显著(P < 0.01)，不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)
4讨论
4.1 抗菌肽的优势
抗菌肽具有新的抗生素类所需要的很多特性。它可以作为单独的抗菌剂使用，也可以与传统的抗生素联合作用，作为免疫调制剂或中和内毒素，因此抗菌肽的临床应用潜力很大。尽管抗菌肽在杀灭一些敏感病菌时效果不如特定的传统抗生素好，但其优势之一就是能有效的作用于多重耐药性菌，其杀菌作用十分迅速且具有复杂的细菌胞内作用靶点。与传统的抗生素相比，抗菌肽具有许多临床应用的优点[7]抗菌肽除了能杀灭细菌、真菌、寄生虫和病毒以外，也对癌细胞有一定杀伤作用，此外抗菌肽在先天及获得性免疫方面扮演者十分重要的角色：2)传统抗生素对细胞的作用靶点通常是单一的个体或者族群，而抗菌肽的作用靶点并不如此特定，可能掺在多靶点;3)在耐药性上，传统抗生素的抗药性菌产生频率大约为10-7-10-10，或者仅仅在亚MIC浓度下几代产生，而对于抗菌肽来说，耐药性一般不能直接产生，需要在亚MIC下诱导许多代后才有耐药性菌产生;4)抗菌肽可以相对独立的发挥其抗菌作用，也可以与其他因子协同作用，显示出更高的活性，抗菌肽之间，抗菌肽与传统抗生素具有协同作用，也与乳铁蛋白、溶菌酶等发生作用以提高活性[8]。通过本实验的结果显示，天蚕素抗菌肽对畜牧生产，饲料加工的发展都有巨大的的推动作用。
4.2抗菌肽作为饲料添加剂应用的优势
抗菌肽能耐受饲料制粒时的高温。规模化发酵生产抗菌肽时经常高温浓缩工序，可充分杀灭酵母菌体而不导致抗菌肽失活，产品在推广应用后不会出现工程菌的扩散而导致环境生态问题。抗菌肽杀菌机理独特，病原菌不易对抗菌肽产生耐药性，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，可大规模生产，生产周期短，生产成本低且不受季节和气候变化等外在环境的影响。再者，抗菌肽产品具有广辟抗菌作用，对畜禽具促生长、保健和治疗疾病的功能，属无毒副作用、无残留、无致细菌耐药性的一类环保型制剂。总之抗菌肽具有独特的而不同于抗生素的作用机理，它广泛存在多种生物体内，是生物体对外界病原物侵染而产生的一系列免疫反映的产物，具有较强的光谱抗菌能力。寻找各种动物内源性抗菌物质，以现代生物技术方法工业化生产这些在抗病原菌上具有动物 “种”专一性或特异性的系列产品，必将成为代替抗生素的新型饲料添加剂。
5.结论
本试验证明，断奶仔猪日粮中添加肽生素效果优于添加抗生素(10%的硫酸抗敌素200 mg/kg和10%的杆菌肽锌1000 mg/kg)，表现在饲料转化率、促生长和抗腹泻等方面。其中，添加250 mg/kg的肽生素即可表现出极显著的优越性。同时，肽生素的无药残无污染，及其生产成本的实用低廉，在抗生素滥用的今天，无疑为断奶仔猪的饲养带来极大便利。
参考文献
[1] 安春菊，盛长忠，李德森，等. 一类潜在的新药——抗菌肽. 中国新药杂志，2003，12(9)：704-707 Nature ,1972,237 (5) :232-235.
[2] 李国栋，钱承军，陆敏，等，一组人工合成抗菌肽的研究.微生物学报，2006，46(3)：492-495.
[3] 万遂如，抗菌肽在猪病防治中的应用，吉林畜牧兽医，2007，5，24-25.
[4] Xiang Chen, Faming Zhu, Yunhe Cao, Shiyan Qiao.2009.Nover Expression Vector for Secretion of Cecropin AD in Bacillus subtilis with Enhanced Antimicrobial Activity. Antimicrob.Agents Chemother. 53(9):3683-3689.doi:10.1128/AAC.00251-09.
[5] Boman HG. Peptide antibiotics and their role in innate immunity. Annual Review of Immunology, 1995,13(3):61-92.
[6] MarrAKGooderham WJ, Hancock RE. Antibacterial Peptides for therapeutic use: obstacles and realistic outlook. Current Opinion in pharmacolog, 2006, 6(5):468-472)1
[7] Hecock R E. The therapeutic potential of cationic peptides. Expert Opin Investig Drugs,1998,7(2.):167-174.
