榴莲壳提取物的制备及其抗炎镇痛作用的研究
背景
榴莲(Durio zibethinus Murr)又称韶子,系木棉科榴莲属长绿乔木榴莲的果实,风味奇异的热带大型鲜果。原产于印度、马来半岛一带,然后传到临近的菲律宾、泰国、斯罩兰卡及印度尼西亚等东南亚和南亚的热带国家。
素有“热带水果之王”的榴莲是药食兼用的水果,含有丰富的矿物质和微量元素,对人体具有多种保健功能。目前,对榴莲的研究主要是集中在遗传育种、营养及化学成分、食品加工、市场营销等几个方面。另外,现代研究表明榴莲壳具有多种对人体有益的营养成分,富含Ca、K、Fe等微量元素和多种氨基酸,具有一定的药用价值。东南亚及我国华南地区居民常用榴莲壳煲汤、煎水等,达到降火解滞、补血益气、滋润养阴等的效果,但对于榴莲壳的药理活性研究还少见报道。为此,近年来榴莲尤其是榴莲壳的化学成分研究和生物活性研究越来越成为人们关注的热点。
目的
比较榴莲壳的提取方法并优化其制备工艺；研究榴莲壳提取物(Duriozibethinus Murr Shell Extract,DSE)的抗炎、止咳、镇痛和抗菌等生物活性,为榴莲壳的开发利用提供实验依据。
方法
(1)DSE制备实验:采用回流法、超声波法法、微波法及半仿生法对榴莲壳有效成分进行提取。实验设计方法采用正交设计来获取各因素的影响并优化最佳工艺提取条件。
(2)抗炎实验:7周龄昆明种小鼠50只,雄性,随机分为5组,每组10只,即正常对照组(蒸馏水10 mg·kg-1)、阳性药对照组(dexamethasone,1 mg·kg-1)、DSE低剂量组(100 mg·kg-1),DSE中剂量组(300 mg·kg-1),DSE高剂量组(900mg·kg-1)。采用醋酸致小鼠腹膜炎性渗出,巴豆油致小鼠耳肿胀,角叉菜胶致小鼠足跖肿胀,2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)致小鼠变应性接触性皮炎,小鼠皮下棉球致肉芽肿增生等实验和方法来评价DSE抗炎的作用。
(3)止咳实验:7周龄昆明种小鼠50只,雄性,随机分为5组,每组100只,即正常对照组(蒸馏水10 mg·kg-1)、阳性药对照组(codeine,20 mg·kg-1)、DSE低剂量组(100 mg·kg-1),DSE中剂量组(300 mg·kg-1),DSE高剂量组(900 mg·kg-1)。采用氨水及802致小鼠咳嗽模型来评价DSE止咳的效果。
(4)镇痛实验:7周龄昆明种小鼠50只,雄性,随机分为5组,每组10只,即正常对照组(蒸馏水10 mg·kg-1)、阳性药对照组(aspirin,200 mg·kg-1)、DSE低剂量组(100 mg·kg-1),DSE中剂量组(300 mg·kg-1),DSE高剂量组(900mg·kg-1)。采用采用醋酸致小鼠扭体反应及热板法评价DSE镇痛的效果。
(5)抑菌实验:采用倍半稀释法测定DSE对余黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,ATCC 29253),表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,ATCC12228),绿脓杆菌(Bacillus aeruginosus,ATCC 27853),大肠杆菌(E.coli,ATCC25922)的MIC。同时采用抑菌圈直接法来评价DSE对上述细菌的抑制作用。
结果
(1)DSE制备实验结果:对于回流法制备DSE,其影响因素的顺序为液料比>回流温度>乙醇浓度>回流时间,其中液料比具有非常显著的影响(n<0.01),回流温度的影响也显著性(p<0.05)；其最佳工艺条件为:回流时间为30 min,回流温度为90℃,乙醇浓度80％,液料比50:1。对于微波法制备DSE,其影响因素的顺序为微波时间>乙醇浓度>微波功率>液料比,其中微波时间、微波功率及乙醇浓度都具有显著的影响(p<0.05)；其最佳工艺条件为:微波时间为20 min,微波功率为800 W,乙醇浓度80％,液料比20:1。对于超声波法制备DSE,其影响因素的顺序为超声功率>超声时间>液料比>乙醇浓度,其中超声功率具有十分显著的影响(p<0.01),超声时间也有显著的影响(p<0.05)；其最佳工艺条件为:超声时间为20 min,超声波波功率为500 W,乙醇浓度20％,液料比20:1。对于半仿生法制备DSE,其影响因素的顺序为第一煎pH>第二煎pH>第三煎pH>提取时间,其中第一煎pH具有显著的影响(p<0.05)；其最佳工艺条件为:第一煎pH为4,第二煎pH为7,第三煎pH为9.5,每次提取时间为30 min。
(2)抗炎实验结果:与空白对照组相比,各剂量DSE对醋酸导致小鼠的腹膜炎性渗出都有非常显著的抑制作用(p<0.001),300 mg·kg-1和900 mg·kg-1 DSE对巴豆油致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用(p<0.05),100 mg·kg-1和300 mg·kg-1的DSE对于角叉菜胶致小鼠足部肿胀各期抑制都有显著性作用(p<0.05)；900mg·kg-1 DSEX对2,4-DNFB所致小鼠变应性接触性皮炎有一定的抑制效果,且量效关系良好；各剂量组DSE对棉球引起的小鼠皮下肉芽肿增生慢性炎症也有显著的抑制作用(p<0.001),且有较好的剂量依赖性。
(3)止咳实验结果:与空白对照组相比,900 mg·kg-1的DSE对氨水和SO2导致的小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数都有较好的抑制作用,且有较好的量效关系。
(4)镇痛实验结果:与空白对照组相比,900 mg·kg-1的DSE能有效地延长醋酸导致小鼠的扭体反应的潜伏期(p<0.05),且对于90minH寸热板导致的疼痛阀值影响有显著性的延长(p<0.05)。
(5)抗菌实验结果:DSE对Staphylococcus aureus,Staphylococcus epidermidis及E.coli等细菌的抑制十分微弱,对Bacillus aeruginosus有较弱的抑制作用。
结论
(1)与传统的回流法相比,微波法、超声波法,尤其是半仿生法都高效、经济、及环保地制备DSE；正交设计不仅可以有效地分析DSE制备过程中各因素的影响情况,而且可以较好地获得DSE制备的最佳工艺条件。
(2)300 mg·kg-1和900 mg·kg-1 DSE对各种元素引起的急慢性炎症都有较强的抑制作用,其效果可能是源于DSE抑制花生四烯酸的相关代谢产物和增强动物免疫细胞的活性有关。
(3)900 mg·kg-1 DSE对化学性刺激物质引起的支气管黏膜感受器有较好的抑制作用。
(4)900 mg·kg-1 DSE对急性化学因素导致的疼痛有一定的保护作用效果明显,DSE对温度等物理因素导致的疼痛镇痛作用较弱。
(5)DSE对于多数细菌几乎都没有明显的抗菌活性,对Bacillus aeruginosus有微弱的抗菌活性。
| 作者 |
吴敏芝 |
| 学科专业 |
药理学 |
| 授予学位 |
硕士 |
| 授予单位 |
南方医科大学 |
| 导师姓名 |
吴曙光庞建新 |
| 学位年度 |
2010 |
| 关键词 |
榴莲壳 提取物 抗炎镇痛作用 |
| 分类号 |
R965 |
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