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（一）选择题 A型题 1．判定基因结构异常最直接的方法是 A． PCR法 B． 核酸分子杂交 C． DNA序列测定 D． RFLP分析 E． SSCP分析 2．不符合基因诊断特点的是 A． 特异性强 B． 灵敏度高 C． 易于做出早期诊断 D． 样品获取便利 E． 检测对象仅为自体基因 3．遗传病基因诊断的最重要的前提是 A． 了解患者的家族史 B． 疾病表型与基因型关系已被阐明 C． 了解相关基因的染色体定位 D． 了解相关的基因克隆和功能分析等知识 E． 进行个体的基因分型 4．若要采用Southern或Northern印迹方法分析某特定基因及其表达产物，需要 A． 制备固定在支持物上的组织或细胞 B． 收集组织或细胞样品，然后从中提取总DNA或RNA C． 利用PCR技术直接从标本中扩增出待分析的片段 D． 收集组织或细胞样品，然后从中提取蛋白质 E． 收集培养细胞的上清液 5．目前基因诊断常用的分子杂交技术不包括哪一项 A． Southern印迹 B． Western印迹 C． Northern印迹 D． DNA芯片技术 E． 等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 6．SNP的实质是 A．碱基缺失 B．碱基插入 C．碱基替换 D．移码突变 E．转录异常 7．DNA指纹的遗传学基础是 A．连锁不平衡 B．DNA的多态性 C．串联重复序列 D．MHC的限制性 E．MHC的多样性 8．在对临床病例进行基因诊断时，若遇到不能检测出已知类型突变的情况，如果表型明确指向某种疾病，适用下列哪一类筛查技术 A． PCR法 B． ASO分子杂交 C． 反向点杂交 D． 变性高效液相色谱（DHPLC） E． STR拷贝异常的诊断 9．生殖细胞若发生基因结构突变可引起哪种疾病 A． 肿瘤 B． 高血压 C． 糖尿病 D． 遗传病 E． 传染病 10．PCR技术容易出现 A．假阴性结果 B．假阳性结果 C．灵敏度不高 D．适用不广 E．操作繁冗 11．目前检测血清中乙肝病毒最敏感的方法是 A．斑点杂交试验 B．等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 C．Southern印迹 D．PCR法 E．Northern印迹 12．核酸分子杂交的原理是 A．磷酸化 B．甲基化 C．抗原抗体结合 D．配体受体结合 E．碱基互补配对 13．目前法医学中主要应用的基因诊断方法是 A．基于Southern印迹的操作 B．FISH检测 C．基于PCR的DNA指纹技术 D．SSCP分析 E．变性高效液相色谱分析 B型题 A．确定被检核酸在组织或细胞中的定位 B．同时对样品中多种类核酸进行检测和分析 C．检测组织样品中的RNA种类和含量 D．检测细胞基因拷贝数的变化或者mRNA含量的变化 E．基因组DNA分析 14．Southern印迹法主要用于 15．Northern印迹法主要用于 16．斑点印迹杂交主要用于 17．组织原位杂交主要用于 18．DNA芯片技术可以 X型题 19．基因诊断的常用技术主要有 A．PCR-RFLP B．Southern印迹 C．RNAi D．ASO分子杂交 E．DHPLC 20．被称为基因诊断间接方法的是下列哪几种 A． RFLP连锁分析 B． 基于STR的微卫星分析 C． 基于SNP的单倍型分析 D． Southern印迹法 E． PCR法 21．对基因连锁分析描述正确的是 A．可能发生基因重组 B．检测方法更为简单可靠 C．结果更为直接和准确 D 家系成员可能不够完整 E．遗传标志杂合性所带信息量有限 22．目前用于基因诊断的遗传标志主要包括下列哪些形式的DNA变异 A．单核苷酸变异 B．短串联重复序列 C．限制性片段长度多态性 D．点突变 E．单核苷酸多态性 23．关于STR，下列说法不正确的有 A．STR大多位于基因组非编码区 B．最常见的是三核苷酸重复 C．同卵双生子的STR不同 D．是继RFLP之后第二代DNA遗传标志 E．重复顺序最多的是（CA）n、（GT）n 24．基因诊断主要涉及哪些方面的技术 A．准确获得足够量样品的技术 B．转基因技术 C．基因敲除技术 D．对样品进行结构或含量分析的技术 E．基因沉默技术 25．符合RFLP技术的选项有 A． 目前主要用于多基因遗传病的基因诊断 B． 需进行足够数量的家系成员分析 C． 重组的发生不影响诊断的准确性 D． 被利用的限制性位点杂合率较高，可以提供基因连锁的有用信息 E． 得名于核酸外切酶消化DNA分子产生不同长度的片段 26．符合DNA芯片技术的有哪些选项 A． 实质是一种基于RDB的技术 B． 高效、高通量且操作易于自动化 C． 一次集成数量巨大的基因探针 D． 代表基因诊断的发展趋势 E． 假阳性率比较高 27．以核酸分子杂交为基础的基因诊断方法有 A．DNA芯片 B．Northern印迹 C．基因序列测定 D．等位基因特异寡核苷酸探针杂交法 E．PCR法 28．结构基因突变主要包括哪些 A．基因重排 B．基因扩增 C．点突变 D．基因缺失 E．基因表达异常 29．符合SSCP（单链构象多态性分析）的选项有 A．其灵敏度随着检测序列的增长而增大 B．检测对象长度以不超过300nt核苷酸为宜 C．其检测准确率高于直接的核酸序列测定 D．检测对象可以是DNA分子 E．检测对象可以是RNA分子 30．mRNA的相对定量分析方法主要包括 A．紫外分光光度法 B．点杂交 C．狭线杂交 D．RT-PCR法 E．Northern印迹法 （二）名词解释 1．基因诊断（gene diagnosis） 2．连锁分析（linkage analysis） 3．限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP） 4．单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP） 5．核酸分子杂交（nucleic acid molecular hybridization） 6．连锁不平衡（linkage disequilibrium） 7．聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） 8．扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism，AFLP） 9．短串联重复序列（short tandem repeat，STR） 10．反向点杂交（reverse dot blot，RDB） 11．产前基因诊断（prenatal diagnosis） 12．植入前遗传诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD） （三）简答题 1．请简述基因诊断的基本流程。 2．简述基因诊断的一般内容。 3．请简述用于连锁分析的遗传标志需具备的特点。 4．请简述遗传分析中用于直接诊断的代表性技术有哪些。 5．试述内源基因结构突变的主要类型以及内源基因结构突变所致的疾病。 （四）论述题 1．试述基因诊断的特点及基本技术。 2．试述PCR技术的原理、步骤及其应用。 3． 试述基因诊断在医学中的应用。 参考答案与提示 （一）选择题
（二）名词解释 1．用分子生物学技术针对DNA和/或mRNA进行定性、定量分析，通过分析这些遗传信息分子的序列，从而在分子水平上确定疾病的病因，具高度特异性。 2．利用与致病基因相连的某些基因，作为遗传标志，通过鉴定遗传标志的存在而判断个体是否带有致病基因。本法无需更多了解致病基因结构及其分子机制，属于间接诊断。 3．指DNA序列上发生某个变异（如单碱基置换、少数碱基缺失或插入）后获得或丢失了某一限制性识别位点，使DNA限制性酶解片段的长度发生变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性类型，可以用作遗传标志。 4．指基因组内特定核苷酸位置上存在两种不同的碱基，其中最少的一种在群体中的频率不小于1%。SNP是一种最常见的可遗传变异，是第三代遗传标志物。 5．利用碱基互补配对，以已知的核酸片段作为探针，检测样本中是否存在及有多少与其互补的核酸序列，这是基因诊断最基本的方法，又称为核酸分子探针技术。 6．在人群中，某一RFLP或者主要存在于具有某一疾病基因的染色体上；或者主要存在于正常染色体上，这种非随机的遗传现象称为连锁不平衡。 7．一种在体外利用酶促反应获得特异序列的基因组DNA片段或cDNA的专门技术。根据样品来源不同分为基因组PCR和反转录PCR两类。 8．PCR扩增致病基因内部或两侧与其紧密连锁的特定STR，电泳检测扩增产物长度的多态性，从而快速作出诊断。 9．指一种2-4bp的核心序列重复排列，又称为微卫星（microsatellite）。在人类基因组中分布广泛，最常见的是二核苷酸重复，其次是三、四核苷酸重复。 10．是改进的等位基因特异性寡核苷酸（ASO）分子杂交技术。将针对各种突变和正常序列的ASO探针固定在杂交膜上，而将原来在ASO杂交体系中固定在膜上的PCR产物改为液相进行杂交，从而能够同时检测多种突变。 11．通过对胎儿羊水、绒毛或脐带血等来源的DNA进行基因型分析或染色体核型分析，达到诊断患病胎儿的目的，主要诊断对象是人类染色体病和单基因遗传病。 12．指对配子或移入宫腔之前的胚胎进行快速的遗传分析，筛选出健康配子或胚胎，以避免异常妊娠的一项技术。 （三）简答题 1．基因诊断的基本流程包括 (1) 样品的核酸抽提。 (2) 目的序列的扩增。 (3) 核酸分子杂交。 (4) 信号检测。 2．基因诊断的一般内容包括 (1) 检测个体的基因序列的特征。 (2) 基因突变分析。 (3) 测定基因的拷贝数。 (4) 基因表达产物分析。 (5) 检测是否存在外源基因等。 3．用于连锁分析的遗传标志，需要具备三个特点 (1) 不同个体之间存在高度的多态性。 (2) 需要获得足够数量的家系成员样本，以区分和确定遗传标志与致病基因之间的连锁关系。 (3) 遗传标志与致病基因相连锁，而且两者之间的距离越小越好，以尽量排除减数分裂中遗传标志与致病基因之间出现重组或交换而误诊。 4．用于遗传分析的代表性直接诊断技术主要有 (1) 基因缺失或插入的诊断 1) Southern印迹法 2) PCR法 (2) 点突变的诊断 1) 等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 2) 反向点杂交 3) 变性高效液相色谱 (3) STR拷贝异常的诊断。 5． (1) 内源基因结构突变包括点突变、缺失或插入突变、染色体易位、基因重排、基因扩增等。 (2) 突变若发生在生殖细胞，可引起各种遗传性疾病；若发生在他细胞，可导致肿瘤、心血管疾病等。 （四）论述题 1． (1) 基因诊断的特点为 特异性高；灵敏度高；稳定性高；诊断范围广，适用性强；临床应用前景好。 (2) 常用技术包括 1) 核酸分子杂交技术，其方法主要有 斑点印迹、Southern印迹、Northern印迹、原位杂交、等位基因特异寡核苷酸探针杂交； 2) 限制性内切酶酶谱分析法； 3) DNA限制性片段长度多态性（RFLP）分析； 4) PCR技术； 5) DNA芯片； 6) 基因测序。 2． (1) PCR技术实际上是在模板DNA，引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸存在的条件下依赖于耐热DNA聚合酶的酶促合成反应。其原理主要有几个方面 1) DNA合成需要引物，两条互补链上都需要引物； 2) DNA的复性与变性的原理； 3) PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。 4) 耐高温的DNA聚合酶的发现和运用。 (2) PCR全过程包括三个基本步骤，即 1) 双链DNA模板加热变性成单链（变性）； 2) 在低温下引物与单链DNA互补配对（退火）； 3) 在适宜温度下Taq DNA聚合酶催化引物3’-OH端加入脱氧核苷酸（延伸）。 这三个基本步骤构成的循环重复进行，可以使特异性DNA的扩增率达到数百万倍。 (3) PCR技术的应用 1) 分子生物学领域 基因克隆；DNA序列测定；突变分析；基因重组；基因定量；鉴定转录调控序列；转座子插入位点的确定；检测基因的修饰； 2) 临床医学领域 病原体诊断；遗传病的基因诊断；器官移植；肿瘤诊断；法医学； 3) 动植物学的研究； 4) 其他领域如组织和群体生物学、古生物学等。 3． (1) 辅助遗传病的临床诊断 针对单基因病（包括少数肿瘤）的确诊及症状前诊断。 (2) 疾病易感性及患病风险预测 1) 遗传病患病风险分析 ① 出生缺陷的产前诊断 分析胎儿的某些特定基因以诊断人类染色体病和单基因遗传病。 ② 植入前遗传诊断（PGD） 对配子或移入宫腔之前的胚胎进行快速的遗传学分析，筛选出健康配子或胚胎，以避免异常妊娠。 ③ 遗传筛查 2) 其他疾病如肿瘤以及常见多基因病，如I型和II型糖尿病、高血压、肥胖、和阿尔茨海默氏病（AD）的易感性预测性诊断。 (3) 疗效评价及用药指导。 (4) 其他应用 法医学个体认定；病原体诊断。
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