【摘要】
观察千斤拔（大叶）水煎液对纳络酮引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠戒断性收缩的作用，及它对乙酰胆碱引起的正常离体豚鼠回肠平滑肌收缩的影响。［方法］通过制作豚鼠离体回肠正常组标本和培养吗啡依赖离体回肠组标本，观察千斤拔水煎液对加入纳络酮（Nal）1min前后对吗啡组戒断性收缩的影响；及千斤拔水煎液对加入Ach
1min前后对正常组回肠收缩的影响。［结果］大叶千斤拔水煎液对乙酰胆碱引起的正常豚鼠回肠收缩和纳络酮引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠戒断性收缩均有抑制作用，并且它的作用呈剂量依赖趋势。［结论］大叶千斤拔水煎液能够抑制吗啡依赖离体回肠平滑肌的戒断性收缩。
【关键词】 千斤拔；吗啡；纳络酮；乙酰胆碱；豚鼠回肠
千斤拔为蝶形花科植物蔓性千斤拔Flemingia
philipinensis的根，本品性甘、微涩、平，补肝肾，有祛风利湿、疏筋活络、强筋壮骨、消瘀解毒的功效。本次实验研究大叶千斤拔水煎液对纳络酮引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠戒断性收缩及对乙酰胆碱引起豚鼠离体回肠收缩的影响，以期对新的戒毒药物的筛选和研究探讨戒毒的机理提供线索。
1 材料和方法
1.1 实验动物
豚鼠20只，雄性，体重299.5±23.5g，实验前禁食12h。由南方医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2006-0015。
1.2 药品与试剂
吗啡，乙酰胆碱，注射用盐酸纳络酮（制药厂：成都诺迪康生物制药有限公司，产品批号：080102），千斤拔煎剂：蝶形花科植物大叶千斤拔F·madrophylla，煎煮前除去杂质，然后用清水浸泡半小时，再煎煮40～50min，将药液水浴70～90℃浓缩至浓度为（50g生药/70ml）0.714g/ml，稀释得到三种水煎液浓度分别为（A）3.57×10-3、（B）1.79×10-3、（C）8.95×10-4g/ml（为加入浴管后的终浓度）。现配Kreb’s液，硫酸阿托品注射液（制药厂：无锡市第七制药有限公司，批号：03081713）。
1.3 仪器
HW-400S恒温平滑肌水槽和JZ100型张力换能器（成都泰盟科技有限公司），PCLAB—UE生物医学信号采集处理系统（北京威信斯达科技发展有限责任公司）。
1.4 方法
1.4.1 回肠标本制备及分组
取已禁食12h的豚鼠（n=20），击头处死，立即剪开腹腔取出回肠，弃去近盲肠部约5cm，迅速置于盛有Kreb’s液的培养皿中并洗净冲去肠腔内容物，每只分别剪取4cm的回肠标本。其中10只豚鼠回肠分别剪取6段，随机分到以下6组中，观察药物对乙酰胆碱（2μg/L）引起的正常组回肠平滑肌收缩的作用：正常回肠空白对照组、乙酰胆碱（2μg/L）对照组、千斤拔（A、B、C）系列剂量组、阿托品（6.25×10-5mg/ml）对照组；另10只豚鼠回肠分别剪取5段，随机分配到以下5组中，观察药物对纳络酮（1μmol/L）引起的吗啡依赖模型组回肠戒断性收缩的影响：吗啡依赖空白对照组、纳络酮（1μmol/L）戒断组、千斤拔（A、B、C）系列治疗组。
吗啡依赖模型制备方法：将回肠悬挂于50ml含3μmol/L吗啡的Kreb’s液中，通入稳定的空气，于恒温平滑肌浴管中在37℃下孵育4h，每15min更换一次Kreb’s液，形成吗啡依赖回肠标本。
1.4.2 豚鼠回肠平滑肌张力测定
将各段回肠标本悬挂于37℃恒温平滑肌水槽内含20ml
Kreb’s液的浴管中，通气管持续通入稳定的空气，回肠下端挂于恒温浴管底部钩上，上端挂于张力换能器金属片上，回肠平滑肌的收缩活动及张力变化通过张力换能器连接计算机并采用PCLAB—UE生物医学信号采集系统记录回肠张力的变化。用PCLAB实时记录回肠平滑肌张力变化，选择参数：低通滤波10HZ，50HZ陷波关闭，时间常数直流，输入范围50mv。实验中所用的药物浓度是浴管中的终浓度。实验前将回肠标本在初始静止张力为2g下平衡15min，待回肠平滑肌活动稳定后开始记录曲线。分别记录用药前后回肠平滑肌张力的峰值，并比较。
将正常组回肠置于含20mlKreb’s液的37℃恒温浴管中，首先记录静止张力下回肠平滑肌收缩曲线，然后记录加入乙酰胆碱2μg/L引起回肠收缩张力变化，并观察在加入乙酰胆碱2μg/L前后1min分别加入各浓度千斤拔（A、B、C/ml）水煎液或6.25×10-5mg/ml阿托品对乙酰胆碱收缩的作用。
将孵育4h的吗啡依赖模型组回肠悬挂于含3μmol/L吗啡的20mlKreb’s液的恒温浴管中，水浴温度为37℃，通过张力换能器记录吗啡依赖回肠静止张力下的回肠收缩曲线和加入纳络酮1μmol/L后引起的吗啡依赖模型回肠组戒断性收缩曲线，观察加入纳络酮1μmol/L前后1min分别加入各浓度千斤拔（A、B、Cg/ml）水煎液对戒断性收缩的影响。
1.4.3 统计方法
以PCLAB生物信号采集系统中回肠收缩曲线张力的峰值为观察指标，各组数据用均数±标准差（x±s）表示，应用t检验。
2.1 对Ach引起正常豚鼠回肠收缩的影响
正常组回肠加入Ach后即引起收缩，回肠平滑肌张力明显增加（图1）；各浓度千斤拔系列剂量组及阿托品可抑制Ach引起的正常组回肠收缩，使回肠收缩张力降低（图2），与仅加入Ach对照组相比较P<0.05，数据总结见表1。表1
千斤拔对Ach 引起的离体豚鼠回肠收缩的影响（略）
与Ach对照组比较，**P<0.01，*P<0.05
2.2 对纳络酮引起的吗啡依赖豚鼠回肠戒断性收缩的影响
吗啡依赖模型组加入纳络酮后，30s内即引起收缩，回肠平滑肌张力明显增加（图3），而正常组回肠在加入纳络酮后肠管张力未见明显增加，说明模型组回肠标本制作成功。不同浓度的千斤拔水煎液均能不同程度地降低戒断性收缩张力（图4），A、B、C系列剂量组与仅加入Nal的模型对照组相比较，P<0.05，数据上总结如下（表2）。表2
千斤拔对Nal引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠戒断性收缩的影响（略）
与nal对照组比较，*P<0.05；与空白对照组比较，##P<0.01
3 讨论
钙通道机制在药物依赖形成中研究较多，越来越多证据证实了电压依赖性钙通道的适应性改变在吗啡依赖的形成中占有重要地位。L-型钙通道阻滞剂通过抑制Ca2+内流同时活化K+通道而对吗啡依赖后的戒断性症状有一定的缓解作用［12］。千斤拔是否存在抑制Ca2+内流的作用需进一步研究；另一方面，吗啡依赖后的生物体存在磷酸化改变，一些实验证实了阿片戒断与蛋白激酶A、蛋白激酶C、腺苷环化酶和环磷酸腺苷（cAMP）的上调相适应。［3］千斤拔可能通过抑制多种磷酸化蛋白质和环磷酸腺苷的上调而具有抑制戒断症状的作用；吗啡依赖还与NO-环磷酸鸟苷（cGMP）路径有关。一氧化氮合酶抑制剂能抑制部分由纳络酮引起的戒断症状；锂离子由于能够抑制合成cGMP的神经递质也具有降低吗啡依赖性的作用［3］。一些实验研究证实大脑中枢神经系统的含血清素系统与阿片类药物药理作用的形成存在广泛联系。已有报道是阿片类药物依赖鼠中的大脑中枢神经系统的5-HT含量增多加强了这种联系。并在豚鼠回肠离体条件下观察到血清素受体的阻断剂（methisergide）能够明显抑制吗啡依赖回肠的戒断性收缩［4］。千斤拔也可能具有血清素受体阻断剂的作用；本实验中千斤拔水溶液能够抑制Ach引起的正常组回肠的收缩，它对M-受体阻断的作用可能是抑制吗啡依赖后的戒断症状的另一作用机制。
本实验在回肠离体水平下，证实了千斤拔水溶液对吗啡依赖后的戒断症状有一定的抑制作用，为干预阿片类药物依赖提供了研究线索。但是其作用的有效成分及作用机制还不明确还需进一步研究。
【参考文献】
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［2］饶伟文，黄建楷，温志芳，等.千斤拔的品种调查与质量研究［J］.中草药，1999，30（3）：219222.
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［4］冯凯，林世和，赵节绪，等.千斤拔对大鼠坐骨神经损伤保护作用的实验研究［J］.中国中西医结合杂志，1999，19（6）：104106.
