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黄连解毒汤与黄连素对2 型糖尿病大鼠葡萄糖和 脂质代谢影响的比较研究3 陆付耳 冷三华 屠庆年 徐丽君 杨明炜 王开富 华中科技大学同济医学院 附属同济医院中医科 中西医结合研究所 , 武汉 430030 摘要 采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养的方法建立W istar 大鼠2 型糖尿病模型, 分别以黄连解毒汤 和黄连素片干预性治疗8 周, 检测血糖和血脂代谢等指标; 结果表明黄连解毒汤组和黄连素组大鼠总胆固醇、甘油三酯、 载脂蛋白B、空腹血糖水平均比模型组明显降低, 而高密度脂蛋白2胆固醇、载脂蛋白A é 水平显著升高, 口服糖耐量 试验改善、大鼠体重减轻, 但黄连解毒汤和黄连素两组之间各指标无显著性差异。含等量盐酸小檗碱的黄连解毒汤与黄 连素片降血糖和调血脂作用强度相近, 提示盐酸小檗碱是黄连解毒汤降血糖和调血脂的主要有效成分。 关键词 黄连解毒汤; 黄连素; 2 型糖尿病; 糖代谢; 脂质代谢 中图法分类号 R283, R58711 Compara tive Study on the Effects of Huangl ianj iedu Decoction and Berber ine on Glucose and L ipidMetabol isms in Type 2 D iabetic Ra ts L u Fuer, L eng Sanhua, Tu Q ingnian et al Institu te of Integ rated T rad itional &W esternM ed icine, T ong j iM ed ical Colleg e, H uazhong U niversity of S cience and T echnolog y , W uhan 430030 Abstract App lying the murine type 2 diabetesmodel induced by the intravenous injection of a small dose of strep tozotocin p lus h igh fat h igh caloric laboratory cow , the animals w ere treated for 8 w eek s respectively w ith berberine and Huanglianjiedu decoction, and then murine serum glucose and lip id metabolic parameters w ere determ ined. It w as demonstrated that in both Huanglianjiedu decoction and berberine group s the levels of serum total cholesterol, triglycerides, apolipop rotein B and fasting blood glucose w ere significantly decreased, w h ile their h igh density lipop roteins2cholesterol and apolipop rotein A é levels increased, glucose tolerance im2 p roved, and body w eigh t reduced, as compared w ith those in model group. Therew as no significant difference of the abovementioned parameters betw een Huanglianjiedu decoction group and berberine group. It is suggested that Huanglianjiedu decoction and berberine would nearly possess the functions of decreasing blood glucose and adjusting p lasma lip ids p rofile in type 2 diabetic rats in the same strength of efficiency. Therefore it is imp lied that berberine is the p rincipal effective component of Huanglianjiedu decoction in the therapy of type 2 diabetes mellitus. Key words Huanglianjiedu decoction; berberine; type 2 diabetesmellitus; glucosemetabolism; lip id metabolism 3 湖北省卫生厅科研基金资助项目(No. 20002138) 陆付耳, 男, 1961 年生, 医学博士, 教授 黄连解毒汤是中医治疗火热毒证的清热解毒经典代表方; 近年来国内外报道其治疗心脑血管性疾 病也显示出良好的应用前景。作者根据中医关于消 渴病的病因病机并结合自己的临床经验, 认为“热 毒”、“瘀毒”、“高糖和高脂毒性”之“毒”在糖尿 第31 卷第6 期第662 页 2002 年12 月 华中科技大学学报(医学版) J Huazhong U niv Sci Tech [Health Sci] Vol. 31 No. 6 P. 662 Dec. 2002 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. ____________________________________________________w_w_w_._p_a_p_e_r_._e_d_u_._c_n 病的发病机制中起重要作用, 提出“糖尿病从毒论 治”的假说[ 1 ] , 在临床工作中尝试应用黄连解毒汤治 疗2 型糖尿病确有疗效。自八十年代以来众多临床 及实验研究均表明, 黄连素(即小檗碱) 对2 型糖 尿病有降糖和降脂的功效。黄连解毒汤与黄连素治 疗2 型糖尿病在降糖和降脂方面究竟有何差别与特 点? 本实验特将黄连素与含等量盐酸小檗碱的黄连 解毒汤对2 型糖尿病大鼠葡萄糖和脂质代谢的影响 进行对照研究。 1 材料与方法 111 材料 黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子按3∶2 ∶2∶2 比例组成, 其药材均购于武汉同济医院药剂 科, 按方法[2 ] 煎煮取汁, 浓缩成清膏(1 g 清膏 相当于115 g 黄连解毒汤生药)。取清膏送武汉药品 检验所以薄层扫描方法测得其所含盐酸小檗碱为 27mg?g; 黄连解毒清膏临用前以含5% 羧甲基纤维 素的PBS 溶液(pH 714) 配成含盐酸小檗碱91375 g?L 的混悬液; 黄连素片为成都亨达制药厂生产, 同 法制成含盐酸小檗碱91375 g?L 的混悬液; 盐酸二 甲双胍片为法国里昂医药工业公司生产, 配制成含 盐酸二甲双胍91175 g?L 混悬液。检测总胆固醇 (TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白2胆固醇 (HDL 2c)、载脂蛋白A é (apoA é )、载脂蛋白B (apoB) 及血糖所需试剂盒均为温州东瓯生物工程 有限公司产品。血清胰岛素( IN S) 放免试剂盒为北 京生物研究所产品。链脲佐菌素为Sigma 公司产品。 112 动物及分组处理 健康雄性清洁级W istar 大鼠60 只, 约2 月龄, 200～ 220 g, 购买并饲养于华中科技大学同济医学 院实验动物学部清洁级动物饲养室, 按屏蔽环境内 动物实验观察与操作规范[ 3 ]进行实验。除作口服葡 萄糖耐量试验(OGTT) 及处死前12 h 须禁食外, 大 鼠自由进食、饮水。随机取51 只大鼠按30mg?k g 体 重剂量尾静脉注射链脲佐菌素后, 用普通饲料喂养 2 周, 然后作OGTT 试验, 筛选糖耐量异常者共43 只随机分组。黄连解毒汤组(HLJD 组) : 10 只, 按 2 m l?1 00 g 体重[ 3 ]剂量给大鼠灌服上述黄连解毒清 膏悬液, 每日8: 30～ 9: 30 灌胃1 次(以下各组灌 胃药液容积及灌胃时间与此同) ; 黄连素组(BER 组) : 11 只, 灌上述盐酸小檗碱悬液; 二甲双胍组 (D IM 组) : 11 只, 灌上述二甲双胍悬液; 模型组 (MOD 组) : 11 只, 灌含5% 羧甲基纤维素的PBS 溶 液。以上4 组在治疗期间喂高脂高糖饮食(蔗糖∶ 猪油∶奶粉∶鸡蛋∶普通饲料= 30∶20∶4∶2∶ 63)。上述大鼠用药剂量是根据临床成人用药剂量 (盐酸小檗碱118 g?d [ 3 ]、二甲双胍117 g?d) 和转换 系数计算而来[ 4 ] , 即BER 组灌盐酸小檗碱187 mg? (kg·d) , D IM 组灌二甲双胍184 mg?(kg·d) ; HLJD 组灌胃药液所含盐酸小檗碱量与BER 组相 同, 即相当于1014 g?(kg·d) 的黄连解毒汤生药 清膏。另9 只大鼠不作任何处理, 以普通饲料喂养, 作为正常对照组(NOR 组)。大鼠治疗8 周后, 用45 mg?kg 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉, 腹主动脉取血, 分离血清用于检测各项实验指标, 并处死动物。 113 实验指标的检测及统计分析 OGTT 试验前禁食12 h 以上, 配制40% 葡萄 糖水按212 g?k g 剂量灌胃。用剪尾的方法在灌胃前 及灌胃后30、60、120 m in 从尾静脉取血约015m l, 30 m in 内分离血清, 用葡萄糖氧化酶法测血糖 (BG) ; TC、TG 均采用酶学方法检测; HDL 2c 采用 镁?钨酸沉淀法检测; apoA é、apoB 采用免疫透射比 浊法检测; IN S 采用放免法检测。计量资料以x q±s 表示, 并进行t 检验。 2 结果 211 黄连解毒汤与黄连素对糖尿病大鼠进食量及体重的影 响 黄连解毒汤组、黄连素组治疗8 周后日进食量 较模型组少, 体重较模型组降低。正常对照组因喂 养饲料与其它组不一样, 故其进食量不予比较, 见 表1。 表1 各组大鼠进食量和体重变化的比较(x q±s) 组别n 体重(g) 进食量(g?d) HLJD 9 30817± 9193 3 1910±0173 3 BER 11 30515±10113 3 1718±2103 3 D IM 11 34817±2012 2111±110 MOD 11 34215±2011 2113±119 NOR 11 30718±16153 3 2616±411 与MOD 组比较 3 3 P < 0101 212 黄连解毒汤与黄连素对糖尿病大鼠口服糖耐量的影响 黄连解毒汤组空腹及餐后30 m in 血糖均低于 模型组(分别为P < 0101 和P < 0105) , 而餐后30、 60 m in 血糖都高于二甲双胍组; 黄连素组空腹及餐 后30、60 m in 血糖均低于模型组(均为P < 0101) , 而空腹及餐后30、120 m in 血糖都高于二甲双胍组; 黄连解毒汤组与黄连素组相比, 所测各时间点未见 显著差异, 见表2。 陆付耳等. 黄连解毒汤与黄连素对2 型糖尿病大鼠葡萄糖和脂质代谢影响的比较研究 ·663· 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. _中__国__科__技__论__文__在__线_____________________________________w_w_w_._p_a_p_e_r_._e_d_u_._c_n_ 表2 各组大鼠治疗8 周后OGTT 结果比较(x q±s, mmol?L ) 组别n BG 0 m in BG 30 m in BG 60 m in BG 120 m in HLJD 10 618±0183 3 912±115△△3 1116±116△△ 911±211 BER 11 714±217△3 3 814±212△△3 3 919±2193 3 1011±211△ D IM 11 519±1113 3 611±0193 3 814±1103 3 811±0193 3 MOD 11 912±116 1019±110 1310±117 1015±113 NOR 9 510±1153 3 611±1143 3 715±1143 3 718±1133 3 与MOD 组比较 3 P < 0105 3 3 P < 0101; 与D IM 组比较 △P < 0105 △△P < 0101 213 黄连解毒汤与黄连素对糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平 的影响 黄连解毒汤组、黄连素组空腹血糖均低于模型 组(均为P < 0101) , 且与二甲双胍组相比无显著差 异; 黄连解毒汤组、黄连素组空腹血糖也无显著差 异; 黄连解毒汤组血清胰岛素显著高于二甲双胍组 (P < 0101) , 见表3。 214 黄连解毒汤与黄连素对糖尿病大鼠血脂的影响 黄连解毒汤组、黄连素组与模型组相比, 其 TC、TG、apoB 均显著降低(P < 0105 或P < 0101) , 而HDL 2c、apoA é 均显著升高(P < 0105 或P < 0101) ; 与二甲双胍组相比, 黄连解毒汤组、黄连素 组TG、apoB 也显著降低(均为P < 0101) , apoA é 明显升高(均为P < 0101) , 见表4。 表3 各组大鼠在干预8 周后血糖及胰岛素水平变 化(x q±s) 组别n FBG (mmol?L ) IN S (LIU ?m l) HLJD 8 711±0193 3 6518± 719△△ BER 11 714±1153 3 5110±1610 D IM 11 714±0193 3 4413±14163 MOD 11 819±113 6212±1612 NOR 9 511±112△△3 3 5313±1714 与MOD 组比较 3 P < 0105 3 3 P < 0101; 与D IM 组比较 △△P < 0101 表4 各组大鼠在干预8 周后血脂水平比较(x q±s, mmol?L ) 组别n TC TG HDL 2c apoA é apoB HLJD 8 1191±01233 0141±0172△△3 3 1137±01163 3 0178±0104△△3 0137±0103△△3 3 BER 11 1183±01323 3 0161±0122△△3 3 1146±01233 3 0180±0108△△3 3 0137±0102△△3 3 D IM 10 2114±0133 1152±0147 1141±01103 3 0171±01063 3 0144±0105 MOD 11 2118±0117 1185±0173 1107±0113 0162±0103 0146±0104 NOR 9 1162±01233 3 0143±0111△△3 3 1148±01143 3 1100±0102△△3 3 0137±0101△△3 3 与MOD 组比 3 P < 0105 3 3 P < 0101; 与D IM 组比较 △△P < 0101 3 讨论 311 黄连解毒汤具有显著的降血糖和调血脂作用 余秀慧等[ 5 ]曾报道用黄连解毒汤治疗糖尿病2 例有一定疗效; 作者在临床工作中亦体会到补肾活 血方药配伍黄连解毒汤治疗2 型糖尿病疗效甚佳。 本实验首次以实验研究为手段, 观察到黄连解毒汤 对实验性2 型糖尿病大鼠的降血糖、调血脂作用。黄 连解毒汤干预糖尿病大鼠8 周后已显示其显著的降 低空腹血糖、改善糖耐量作用; 黄连解毒汤既能降 低TC、TG、apoB, 又能升高HDL 2c、apoA é ; 2 型 糖尿病以TG 升高为主, 而黄连解毒汤降低TG 作 用尤其突出, 降至仅为模型组的2212% , 接近正常 对照组; 提示黄连解毒汤治疗2 型糖尿病可能具有 改善脂质代谢紊乱而预防心血管并发症的作用。此 外, 与模型组比较, 黄连解毒汤组大鼠进食量减少, 体重明显减轻, 提示其可能有一定的减肥作用, 为 其用于治疗肥胖性2 型糖尿病的又一优势。作为阳 性对照的二甲双胍组在改善糖耐量试验方面较为显 著, 且能升高HDL 2c、apoA é 水平, 但其在降低空 腹血糖水平方面并不优于黄连解毒汤组, 且其TC、 TG、apoB 水平降低并不显著。 312 黄连解毒汤与黄连素治疗实验性2 型糖尿病大鼠的疗 效比较 本研究结果再次证实了黄连素治疗2 型糖尿病 确切的降血糖和调血脂作用; 黄连素与含等量盐酸 小檗碱的黄连解毒汤相比, 在降低空腹血糖、调血 脂方面无显著差异, 而在改善糖耐量方面黄连素似 乎更胜一筹, 因此提示盐酸小檗碱可能是黄连解毒 汤治疗2 型糖尿病的主要有效成分; 盐酸小檗碱可 ·664· 华中科技大学学报 (医学版) 2002 年12 月第31 卷第6 期 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. _中__国__科__技__论__文__在__线_____________________________________w_w_w_._p_a_p_e_r_._e_d_u_._c_n_ 在一定范围内替代黄连解毒汤应用于临床治疗2 型 糖尿病。 高从容等[ 6 ]曾报道, 小檗碱能增强胰岛素敏感 性; 陈其明等[ 7 ]报道盐酸小檗碱对正常小鼠、自发性 糖尿病小鼠及四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠均有降糖 作用, 推测盐酸小檗碱可能兼有磺脲和双胍类化合 物的作用特点, 具有促进胰岛素分泌和增强胰岛素 敏感性双重作用。黄连解毒汤中黄连及黄柏均含有 大量小檗碱, 小檗碱是黄连解毒汤的最重要的有效 成分之一。本实验中, 黄连解毒汤组空腹血糖虽与 二甲双胍组相当, 但是其血清胰岛素水平并不降低, 且显著高于二甲双胍组。该结果提示黄连解毒汤或 其所含主要成分小檗碱, 在治疗2 型糖尿病降血糖 的作用机理方面除了改善胰岛素抵抗外, 还可能兼 具促进胰岛素分泌作用。由于机体胰岛素分泌调节 的复杂性, 本实验尚难以证明黄连解毒汤或所含小 檗碱是否具有直接促进胰岛素分泌作用, 须进一步 研究验证。 参 考 文 献 1 陆付耳, 王智民, 郭爱群1 糖尿病从“毒”论治探讨. 中 国中医基础医学杂志, 2002, 8 (5) : 315 2 吴洪元, 姜晓群, 陈贤琼. 黄连解毒胶囊提取工艺研 究. 中成药, 1998, 20 (1) : 1 3 孙敬方主编. 动物实验方法学. 北京: 人民卫生出版社, 2001. 137～ 139, 197～ 212 4 施新猷主编. 现代医学实验动物学. 北京: 人民军医出 版社, 2000. 332～ 335 5 余慧秀, 范中明. 黄连解毒汤治疗糖尿病2 例. 江西中 医药, 1996, 27 (1) : 24 6 高从容, 张家庆, 黄庆玲. 黄连素增加胰岛素抵抗大鼠 模型敏感性的实验研究. 中国中西医结合杂志, 1999, 17 (3) : 162 7 陈其明, 谢明智. 黄连及小檗碱降血糖作用的研究. 药 学学报, 1986, 21 (6) : 401 (2001204201 收稿) (上接第661 页) 8 Ch ristopher Hobbs. 贯叶金丝桃的研究. 国外医药植物 药分册, 1990, 5 (4) : 150 9 Keah ler S T, Sinner A , Baghai T et al. Hyperforin en2 hances the extracellular concentrations of cate2 cholam ines, serotonin and glutamate in the rat locus coeruleus. N eurosciL ett, 1999, 263: 199 10 Raffa R B. Screen of recep tor and up take2site activity of hypericin component of St. John’ swort reveals sigma re2 cep tor binding. L ife Sci, 1998, 62: PL 265 11 Jacobson J M , Feinman L , L iebes L et al. Pharma2 cok inetics, safty and antiviral effects of hypericin, a derivative of St. John’ s wort p lant, in patients w ith ch ronic hepatitis C virus infection. A ntim icrob A gents Chemother, 2001, 45: 517 12 M iccoli L , Beurdeley2Thomas A , De P inieux G et al. L igh t2induced photoactivation of hypericin affects the en2 ergy metabolism of human glioma cells by inh ibiting hex2 ok inase bound to m itochondrin. Cancer Res, 1998, 58: 5777 13 Evstifeeva T A , Sibiriak S V. The inmmunotrop ic p rop2 erties of biologically active p roducts obtained from Kla2 mathW eed (H y p ericum p erf oratum L ). Ek sp Klin Far2 makol, 1996, 59: 51 (2002205224 收稿) 陆付耳等. 黄连解毒汤与黄连素对2 型糖尿病大鼠葡萄糖和脂质代谢影响的比较研究 ·665· 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
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