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感染HPV病毒检测方法

 段芝堂健康汇 2013-11-29

 Hpv阳性是指对人乳头瘤病毒的判断标准,HPV阳性代表经检测发现了感染HPV病毒。HPV病毒是一种DNA病毒,人类是HPV病毒唯一的宿主。HPV病毒进入机体皮肤粘膜后,主要潜伏于表皮内基底细胞间,一旦时机成熟它就会致病。目前为止,科学家们已经发现了它有60多个亚型,不同的亚型导致不同的疾病。


    感染HPV病毒检测方法迄今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。

    1、组织病理检查:可见角化细胞和凹空细胞。准确率80-90%。

    2、抗HPV衣壳抗原的免疫组织化学检查:用HPV免疫动物后产生的多克隆抗体查组织HPV抗原。常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。)还有PAAP、ABC法等。在空泡细胞核内见到棕褐色颗粒状沉着为阳性;检测率低、敏感性不高、不能分型,阳性率40-60%。

    3、基因诊断:

    1、聚和酶链反应:发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高,GP-PCR方法中若以凝胶电泳直接分析结果,可检出标本中200个拷贝的HPVDNA,若以核酸杂交检测PCR产物,敏感性提高,能检出10个拷贝的HPVDNA。

    刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。

    PCR检测可见特异性HPV-DNA扩增区带。鉴于PCR技术的高度敏感性,以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求,避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下,PCR扩增产物经凝胶电泳,观察产生的DNA可直接作出诊断。因此,PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。不足之处为不能定位,不知病毒是否活、死。易出现假阳性。愈后相当长的时间内可持续阳性。特异性也逐渐降低。

    3.、DNA杂交法:HPVDNA分子杂交技术。如PCK法。EGFR免疫染色法。CP?14(Leu?M3)免疫染色法(荧光显微镜400倍可看到3个以上荧光点为阳性)。可以分型,核酸杂交可检出HPV-DNA相关序列,PCR检测可见特异性HPV-DNA扩增区带。但烦琐、昂贵。需要一定的设备和条件。

    4、组织化学检查:取少量病损组织制成涂片,用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原,则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。

    5、细胞学检测:用-疣体组织涂片做巴氏染色,可见两种细胞,即空泡细胞及角化细胞。可诊断。

    6、局部实验法:甲苯胺蓝实验:1%甲苯胺蓝涂抹疣体或周围正常皮肤干燥后用1%醋酸脱色,仍有染色者为阳性。见于肿瘤或尖锐湿疣患者。

    7、透射电镜检测:角朊细胞阳性率底。25-45%。可配合阴道镜、放大镜检查。

    8、阴道镜检查:须醋酸白实验协助。只要正规医疗机构检测,一般都比较准确。

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