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摄影篇 软件章 分类节--显微摄影

 LOFT生活 2014-06-26
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【概    念】
 
定义1:把显微镜和摄影机相结合,用来摄取微小物体的高倍放大摄影。
定义2:利用摄影方法记录物体的显微图像的过程
 
    即连接显微镜与摄影装置,使通过显微镜观察到的物象记录于感光胶片上,从而获得镜头画面的摄影方法。
 
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【原理 术语】
 
1. 根据显微镜的结构可知:
    当被观察的标本放在物镜前焦点稍外一点的位置时,将在目镜前焦点内侧且靠近焦点的位置处形成一个放大倒立的实像,这时再通过目镜(这时的作用象普通放大镜)就可看到一个放大倒立的虚像。
2. 如果调节物镜成像的位置(可使标本适当远离物镜或升高目镜,即增大目镜与物镜间的距离,使中间成像介于目镜的一倍焦距与两倍焦距之间),使物镜所成的像位于目镜前焦点的外侧,此像再经过目镜放大,即可在目镜的另一侧得到一个经二次放大的正立实像,当光源足够强时,此像可使底片或相纸感光,或者使数码相机、摄像机的CCD光电元件感光成像
 
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【镜 选择 术语】
 
    复消色差物镜 / 摄影专用目镜 或 平周目镜配合
 
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【照明方法 术语】
 
1. 透射照明
2. 落射照明(垂直照明)
3. 明视野
4. 暗视野照明
    同时还应注意各种滤色片的选用。
 
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【感光材料 术语】
 
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    一般为溴化银乳剂,将其涂在胶片上就成为胶卷(底片),如果将其涂在纸上就成为感光纸,曝光时在光的作用下部分溴化银粒子被还原成金属银而形成潜像,这就是拍照过程。
    再经过显影液的作用,潜像就变成黑色金属银留在乳剂中,金属银还原的多少即黑度的深浅与曝光时间的长短和光的强弱及波长有关,再经过定影液作用,将未还原的溴化银熔解在定影液中,底片该处就呈透明,这时底片呈现与实物相反的影像,叫做负片。
    用印相纸复印,就能得到平常所见的照片,(复印是将印相纸的药膜面和底片的药膜面紧贴后曝光,再经显影、定影处理后即得照片)。  
    实用显微摄影的方法主要有三种(注:不包括本实验所用的相纸感光):
  
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1. 利用传统的菲林相机,让被摄物体成像于黑白或彩色胶片上,制成负片,再把它冲印放大成照片(正片),以便观察研究和永久保存。
    或者让被拍摄物体成像于反转片上,直接制成正片,用于幻灯投影。要求不高时也可直接成像于相纸上,成为一负片,并不影响相片的分辨率。本物理实验室为本、专科学生提供这一显微摄影广方法。   
 
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2. 利用数码相机,通过专用接筒或外接专用镜头,把被摄物体成像于数码相机的内存中。
 
    成为一个压缩的JPEG文件,传输到计算机中,再利用图像显示软件把图像显示于监视器上,或者直接通过打印机输出相片来。
    也可把图像存贮于媒介上,如软盘、闪存盘、光盘等,再通过数码冲印商店,冲印出数码相片。
    由于目前大多数数码相机都是不可变换镜头的相机(除了个别昂贵的专用数码相机,如Nikon的D1型相机外),所以显微镜不设连接数码相机的卡口,而通过加设一镜头接筒的方法,再连接某些特殊镜头结构的数码相机
 
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3. 在显微镜上加接专用连接镜头,接上CCD摄录镜头,再把动态的图像传送到计算机,通过软件在显示器上表现出动态图像来,可把Video图像存储成某种格式的文件,如avi、mpeg或mov等。
    也可把瞬间的影像保存到计算机中,成为储存器上的一静态图像的文件,如bmp、tif或jpg等,与数码相机所获得的图像相似。
    这种方法的优点是能够获得动态图像,在视觉效果上更生动、更胜一筹。
    不过其静态图像的分辩率一般只能用于电视机或显示器上的显示,并不适合于打印输出和印刷等领域。
 
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【条件 术语】
 
1. 制作清晰的标本片,其中组织切片应厚薄适度,染色片不应有多余的染料等。
2. 选择性能优良干净的载玻片和盖玻片。
3. 使用高性能的物镜(最好用复消色差的平场物镜)和聚光器。
4. 采用Kohler照明法。
5. 选择好合适的拍摄胶片。
6. 拍摄时应准确地聚焦和选择合理的曝光时间。
7. 正确的冲印方法。
 
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【曝光 术语】
 
    虽然现在的相机均有自动测光或自动曝光功能,但是如果一个视野中亮处面积超过二分之一,则易出现曝光不足的现象,所以如果标本主体小,又处在亮背景中,就要适当增加曝光时间。
  在控制曝光时,要注意以下因素:   

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1. [光源强度]
 
    由于电压的变化,光源亮度可能产生5-10倍的变化。
 
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2. [光源的距离及对标本的照射面积]
 
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3. [光源的波长及色温]
 
    光源的波长长、色温低,色光偏红时,曝光时间要长些。光波短,色温高,色光偏青时,曝光时间要短些。
 
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4. [电压稳定]
 
    电压的波动会引起曝光量的改变,所以摄制过程中要保持电压的相对稳定。
 
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5. [固定聚光器]
 
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6. [镜片曝光]
 
    使用滤色镜、乳白玻璃、偏振镜等都要按其曝光指数增加曝光时间(手动曝光)。
    标本与目镜间的介质折射率大、曝光时间短,反之,曝光时间长。曝光时间与折射率成反比。
    聚光镜的光阑孔径变化能使曝光产生2~20倍的变化。
 
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7. [目镜放大倍率]
 
    以×5倍的目镜作曝光基准1时,×10倍目镜要4倍的曝光量,×15倍目镜要增至9倍的曝光。
 
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8. [物镜的倍率和N·A值]
 
    如果把×10倍的目镜作为1时,×40倍目镜要2.5倍的曝光,×100倍的物镜要4倍的曝光。
 
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9. [标本的染色]
 
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10.从目镜出射点到感光片的距离 
 
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【反差 术语】
 
    光学显微摄影的反差强一些为好,影响反差的因素有以下方面:
  
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1. 标本本身对反差的影响   
 
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2. 标本切片厚会产生光的折反射,同时细部结构产生重叠。
  
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3. 标本新鲜、色彩鲜艳反差强。   
 
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4. 标本载物片厚或盖片厚、有色、有水纹都会降低反差。
  
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5. 照明对反差的影响
    照明应适中,否则会降低反差,太亮会冲击标本细部结构,太暗会使光路中的脏物呈现在影屏上。
  光束直径与视场直径一致时反差强,光束直径大于视场直径就会降低反差。
 
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6. 集光器与虹彩对反差的影响
    集光器过低、虹彩与光栏小,都会降低反差,所以要依具体情况升降集光器或开放虹彩。虹彩光阑的直径必须与物镜口径一致。
 
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7. 滤色片对反差的影响
    用补色滤色片反差强,用统一色滤色片反差弱。
 
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  光学显微摄影的反差虽然是大些为好,但也要适当处理,不然反差过大就会损失细部结构, 同时也会影响分辨率,同样不能得到完美的效果。
 
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【本文摘自:网络搜索】
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