|
杜仲为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv．) 的干燥树皮，为名贵中药材，始载于《神农本草经》，列为上 品，具有补肝肾、强筋骨、安胎[1]之功效。杜仲皮含有多种 活性成分[2]，其中绿原酸(Chlorogenic Acid)和松脂醇二 葡萄糖苷(Pinores inoldiglucoside，PDG)有降压作用E3，4l。 本文以绿原酸含量为指标，比较各炮制方法对其含量的影 响，为临床盐制杜仲提供科学的依据。
l 仪器与试药 1．1 仪器 Sartorius BP211D型电子分析天平(德国)，Fw177型 中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，Waters2690 高效液相色谱仪，Waters996二极管阵列检测器，Millenni— urn32色谱工作站，H66O25T型超声清洗仪。 1．2 试药 杜仲原药材购自西安市药材市场，经陕西中医学院中 药教研室王继涛教授鉴定为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv．)的干燥树皮 绿原酸对照品(购于中国药 品生物制品检定所，批号：0753—200111)。流动相所用甲醇 为色谱纯，水为重蒸水(实验室自制)，盐水均为2％的食盐 水溶液，磷酸等其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 不同炮制品的制备 杜仲生品的制备：将杜仲除去粗皮，洗净润透，用切药 刀切成3~4mm的横丝(垂直于胶丝的生长方向)。 不同炮制品的制备： 清炒法：取100g杜仲丝置炒制容器内，中火炒至颜色加深，有焦斑，丝易断时，取出晾凉。 盐炒制1：取100g杜仲丝，置容器内加盐水拌匀，加盖 闷润。待盐水被吸尽后，置炒制容器内，中火炒至颜色加 深，有焦斑，丝易断时，取出晾凉。 盐炒制2：取lOOg杜仲丝，置炒制容器内，中火炒至颜 色加深，有焦斑，丝易断时，取出，喷淋盐水拌匀，再置炒制 容器内炒干，取出晾凉。 盐制砂炒1：将河砂置锅内炒至灵活状态后，取用盐水 闷润好的杜仲丝100g倾人锅内，中火反复翻炒20min，取 出晾凉。 盐制砂炒2：将专用温度计置入锅内，放入适量细砂， 将100g杜仲丝置入锅内，中火反复翻炒20min后取出，筛 去细砂，喷淋盐水拌匀，再置炒制容器内炒干，取出晾凉。 盐蒸制：取100g杜仲丝，置容器内加盐水拌匀，加盖闷 润。 待盐水被吸尽后，置锅内中火蒸制1h，取出晾凉。 2．2 色谱条件 色谱柱：Welch Materials C18(4．6ramX250mm，5p．m)； 流动相：甲醇一O．4％磷酸溶液(25：75)；柱温：25℃ ；检测波 长：327nm；流速：1mL·min ；进样量：1％I 2．3 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品，精密称定，加甲醇溶解、定容，制成每 1mL含绿原酸0．406mg的对照品溶液，备用。 2．4 供试品溶液的制备 取上述不同炮制品粉末各1g，精密称定，置于三角瓶 内，精密加入甲醇25mL，称重，超声lh，取出，用甲醇补足 缺失量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2．5 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液1mL，置10mL量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取8、10、12、14、16、18、 20 L，按2．2项下的色谱条件测定。以进样量( g)为横坐 标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：y一 3174278．9899X+1505．6609(r一0．9996)，结果显示，绿原酸对照品在0．324~0．812~g范围内线性关系良好。 2．6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、 6、8、10、12h进样10gL，测定绿原酸的峰面积。结果表明， 供试样品在12h内峰面积稳定，RSD为1．62 。 2．7 精密度试验 取同一供试品溶液IO／~L，按上述色谱条件，连续进样5 次，测定绿原酸的峰面积。结果表明，精密度良好，RSD为 0．97 。 2．8 重复性试验 取同一样品共5份，照“供试品溶液制备”项下的方法 制备供试品溶液，按上述色谱条件，测定绿原酸的峰面积。 结果表明，本方法重复性良好，RSD为0．59 。 2．9 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，精密加入一定量的绿原酸对 照溶液，照“供试品溶液制备”项下的方法制备供试品溶液， 按上述色谱条件，取1O“L注入液相色谱仪，测定绿原酸的 峰面积，计算回收率。结果表明，绿原酸的平均回收率为 99．92 ，RSD为1．68 。结果见表l。 2．1O 样品的含量测定 分别吸取各供试品溶液10ttL，注入液相色谱仪，按2．2 项下的色谱条件测定，记录峰面积，由回归方程计算绿原酸 的含量，结果见表2，对照品及样品HPLC色谱图见图1。 结果表明：不同炮制样品中，绿原酸含量：盐蒸制>盐制 砂炒2>盐炒制2>盐制砂炒1>盐炒制1>清炒>生品。 3 讨论 (1)流动相的选择，通过对乙腈一不同浓度磷酸溶液系 统，及其乙腈一磷酸溶液不同比例的洗脱系统进行考察，最 终选择甲醇一0．4 磷酸溶液(25：75)出峰较为理想，可达 到基线分离。 (2)对于检测波长的选择，进行了全波长扫描，绿原酸选用327nm，系统稳定性好，干扰小。 (3)通过对不同炮制方法对杜仲中有效成分影响的实 验研究，结果表明，生品的绿原酸含量明显低于各炮制品， 这可能是由于生品杜仲中橡胶丝的作用使其有效成分难以 溶出，这为传统的“炒断丝”炮制标准提供了理论依据。 (4)盐制杜仲中绿原酸的含量普遍高于清炒法和生品， 这为盐制入肾的传统用药理论提供了科学依据。 (5)通过对不同盐制杜仲方法的比较，结果表明，砂炒 杜仲中绿原酸的含量高于不加砂的炮制方法，这可能是由 于砂可以提高炒制温度，传热也比较均匀，进而提高了杜仲 的断丝率所致。 (6)盐蒸制杜仲中绿原酸的含量最高，但是否优于传统 的炒制法，还有待于进一步研究。 |
|
|
