兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施

兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施 1 1 2 王文杰 段巨刚 石 刚 1 1 2 （1.河北东光县农业局 ，河北沧州 061600； 2. 河北东光县职业技术教育中心，河北沧州 061600） 摘要：兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的各种兔病的总称。临床症状表现以全身败 血病、传染性鼻炎、流行性肺炎而多见，是严重危害养兔业重要的传染病之一。 本文从该 病的病原、流行病学特点、症状与病变、诊断与防控方面进行阐述，旨在为兔场科学防治巴 氏杆菌病提供参考。 关键词：兔巴氏杆菌病；诊断；防控措施 兔巴氏杆菌病（Pasteurellosis）又名出血性败血症，是由多杀性巴氏杆菌引起的一种 多型性、散发性或地方流行性、细菌性传染病 【1,2】 。由于病菌的毒力、感染途径以及病程长 短不同，其临床症状和病理变化也不同。主要有全身败血病、传染性鼻炎、 、地方流行性肺 炎、结膜炎、中耳炎、生殖器官感染和脓肿。 【3,4】 家兔对多杀性巴氏杆菌十分敏感，发病率 【5】 高达 60%以上， 若不及时采取有效措施， 易引起大量发病和死亡， 郭永刚 【6】 等、 李佳丽 【7】 等对兔巴氏杆菌的诊断进行了报道， 一致认为本病是严重危害养兔业的重要传染病之一； 随 着养兔生产高度集约化，本病发生呈上升趋势，另外由该病引发兔只死亡、生长缓慢、饲料 报酬降低及药物防治费用增加等， 给养兔业造成了严重经济损失， 应引起广大养殖户及有关 部门的足够重视。 1 病原 兔巴氏杆菌病的病原为多杀性巴氏杆菌，呈革兰氏阴性 、两端钝圆、细小、卵圆形的 短杆状菌 ，大小为（1-1.5）×（0.25-0.5）μm。单个存在，有时成双排列。用瑞氏染色 或亚甲蓝染色呈典型两级染色。无鞭毛，不形成芽孢，新分离的强度菌株有荚膜，但经培养 后荚膜迅速消失。本菌为需氧或兼性厌氧菌。 该病菌存在于病兔的血液、内脏器官、病变局部和一些外表健康的家兔的上呼吸道粘 膜及扁桃体内。 该病菌对外界环境因素的抵抗力不强，在眼光下暴晒 10min，或 56℃加热 15min ，或 60℃加热 10min 可被杀死。在干燥空气中 2-3d 死亡，在厩舍及粪便中能存活一个月左右， 在尸体内能存活三个月。一般常用的消毒药都能将其杀灭。1%福尔马林、1%石碳酸、1%漂白 粉、01%升汞等溶液，经 3-5min 即能杀死。对青霉素、链毒素、四环素、土霉素、磺胺类及 许多新的抗菌药物敏感。 1 该菌在鲜血和血清培养基上生长良好，但在普通培养基上不能生长，由于巴氏杆菌毒 力强弱不同，呈三种菌落形态。从败血型死亡的兔子新分离的毒力强大的菌株，在血清琼脂 表面上培养 24h 后长出菌落，在折射光下有荧光、圆整、半透明、 细小。 在肉汤内一致浑浊， 称光滑型（S 型） 。从慢性病例或带菌者所分离的菌株，中心多半为不透明的粘性大菌落， 无荧光。在肉汤内一致浑浊，称粘液型（M 型） 。从带菌者分离的菌株，常出现粗糙而干燥 的菌落。在肉汤内产生颗粒状沉淀物，称粗糙型（R 型） 。 【8】 2 诊断 根据流行病学、临床症状与病变特点，可作出初步诊断，进一步确诊需进行实验室检 查。败血型和肺炎型可从心血、脾、肝或体腔惨出物等取病料做细菌学检查，其他病例主要 从病变部位、脓汁、渗出物和呼吸道、阴道分泌物中检查病原。对慢性病例和健康带菌的家 兔可采取血清学方法进行诊断 2.1 涂片镜检 无菌取病兔心血肝脾等有病变组织作涂片，自然干燥，火焰固定，分别瑞氏及革兰氏 染色、镜检。可见到单个或多个短杆菌散在排列。瑞氏染色细菌呈蓝色的短小杆菌，两极着 色，周边有淡红色的荚膜；革兰氏染色呈两极着色的阴性短杆菌。 2.2 细菌分离培养 ①无菌取病兔心血和肝脾，接种于鲜血琼脂平板和麦康凯平板上，37℃培养 24h，结果 麦康凯平板上无任何菌落，而鲜血琼脂平板上则可见许多淡灰色、圆形湿润、露珠样的小菌 落，菌落周围不溶血。 取典型菌落做革兰氏染色，镜检，可见该菌为革兰氏阴性，两极浓染， 两端钝圆，有荚膜的短杆菌。然后，挑取镜检后的菌落进行纯培养，制得分离菌株 ②将分离菌株接种到普通琼脂上生长出菌落形态为灰白色、 针尖大小的菌落或不生长。 ③将分离菌株划线接种于血清琼脂平板和麦康凯平板，37℃培养 24h，可长成淡灰色， 表面光滑闪光、边缘整齐、露珠样小菌落，直径约 2-3mm，有臭味，将该血清平板放于显微 镜下，于 45 折光观察，可见菌落呈蓝绿色带金光，边缘有窄的红黄光带，为 Fg 型菌落。 ④将分离培养菌株接种于肉汤，37℃培养 24h，培养物呈轻度混浊，于管底部生成黏稠 沉淀，表面灰白色形成菌环。 ⑤将分离菌株接种到三糖铁培养基上 37℃恒温培养 24h，其底部变黄。 2.3 生化试验 将所分离的菌株分别接种于各种生化培养基，做鉴定培养，结果；该菌株能分解葡萄 糖、蔗糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇，不发酵乳糖、木糖、鼠李糖、山梨醇、枸橼三钠； 靛基质反应、硝酸盐还原反应、吲哚试验、接触酶试验、血浆凝固酶试验、氧化酶实验、产 ：MR、VP 酸、产生 H2S 和氨均为阳性（也有试验不产气，可能是由于菌株间的差异造成的） 。 【9】 。 2 试验均为阴性；尿素酶试验为阴性；不液化明胶，石蕊牛乳无变化，三糖铁可生长，底部变 黄 [11] 。 2.4 动物回归试验 2.4.1 小鼠感染试验 取新分离菌株纯培养，制成细菌纯培养液（获取病兔的肝组织，用生理盐水做成 1:10 的混悬液） ，接种小鼠 5 只，每只腹腔注射细菌纯培养液（或混悬液）0.2ml，24-48h 全部 死亡。解剖该死亡小鼠，临床症状、病理变化均与自然发病兔相同。去心血、肝组织进行接 种培养，可见典型菌落，经染色，镜检，可见革兰氏阴性两极浓染的小杆菌。 2.4.2 家兔回归试验 取新分离菌株纯培养，制成细菌纯培养液（或取病兔的肝组织，用生理盐水作成 1:10 的混悬液） ，接种家兔 2 只，每只皮下注射细菌纯培养液（或混悬液）0.2 ml，24-48h 全部 死亡。解剖该死亡兔，临床症状、病例变化均与自然发病兔相同。取心血、肝组织进行接种 培养，可见典型菌落，经染色，镜检，可见革兰氏阴性两级浓染的小杆菌 2.5 药敏试验 选用 14 种抗菌药敏纸片，按照美国 NCCLS 药敏试验纸片扩散法规，检测分离菌对这些 抗菌药物的敏感性。结果分离菌株高敏的药物为：乙酰螺旋霉素、氨苄青霉素、链霉素、复 方新诺明、庆大霉素、氟苯尼考；对分离菌株中敏的药物是：丁胺卡那、红霉素，对分离菌 株不敏感的药物是：四环素、强力霉素、羟苄青霉素、痢特灵、多粘菌素及丙氟哌酸。 2.6 血清学试验 试管法：将待检兔的血清做成不同稀释度，加入等量诊断抗原。凝集价在 1：40 以上 者均为阳性反应。 玻片法：取被检血清 0.1 ml 加于玻片上，随后加入等量抗原，于 15-20℃温度下进行 摇动玻片使抗原与被检血清均匀混合。阳性反应在 1-3min 内，出现絮状物，液体透明 [13] [12] 。 。 ３防控措施 3.1 预防 3.1.1 建立无多杀性巴氏杆菌种兔群是防治本病的最好办法。这种兔群是通过选择无鼻炎临 床症状，并经常对鼻腔连续进行细菌学检查，多次的血清抗体检测，选留无多杀性巴氏杆菌 的种兔建立起来的。有条件的兔场用剖腹取胎，或自然分娩后，立即将仔兔隔离进行人工喂 养的方法，建立无特定病原体兔群则更为理想。 3.1.2 坚持自繁自养原则， 不从疫区引种或购买商品兔， 引种兔时要严格检疫并隔离观察 30 天，无鼻炎临床症状，进行细菌学和血清学检查，确定无病后方可并群。 3.1.3 加强饲养管理，增强机体的抗病能力。家兔是草食动物，应以青粗饲料为主，精料为 3 辅，饲料要注意营养成分合理，符合饲养要求。由于饲料的季节性不同，在改变饲料时要逐 步过渡，约 1 周左右可全部更换。饲喂时要定时定量，使家兔养成定时采食和排泄的习惯， 同时根据家兔的年龄、体重、个体差异，季节特点及兔体对饲料的需要，制定每兔每天的采 食量，不可忽多忽少。饲料和饮水必须清洁卫生。 3.1.4 消除一切应激因素 在饲养过程中采取积极防范措施，创好良好的饲养条件，把应激因素减少到最小程度。 兔舍应与其他畜禽场分开，严禁混养，控制饲养密度，保持安静，清洁舒适，通风良好，冬 天要保温防寒，夏天要降温防暑，雨季要防潮。 3.1.5 搞好清洁卫生和定期消毒，减少疫病感染机会 兔舍和兔笼内外要经常打扫消毒，保持兔舍的干燥、清洁卫生，同时定期进行消毒，食 槽、水槽及其饲养用具可选用百毒杀剂进行消毒。经常检查兔群，发现病兔立即隔离封锁， 严格淘汰病兔，兔舍及周围环境可用 10%-20%石灰乳、2%-3%烧碱水、0.3%过氧乙酸、1%漂 白粉等进行消毒，器械用具可用 2%-3%烧碱水或 0.3%来苏儿消毒，兔笼最好用火焰消毒，也 可用 2%石灰乳、3%的来苏儿、2%-3%烧碱水消毒。对病死兔及其污染物作无害化处理。病兔 使用高敏药物治疗，对健康兔中的易感兔群紧急注射巴氏杆菌疫苗。 3.1.6 药物预防 每 50Kg 饲料中加 8-10g 乙醇，均混合于饲料中饲喂，可获得较好的预防效果。 3.1.7 预防注射 30 日龄以上的家兔首免兔巴氏杆菌灭火苗，皮下注射 1 ml，间隔 14 天后在皮下注射 1.5ml ，免疫期 3—6 个月，种兔每年注射 3 次。也可使用兔瘟巴氏杆菌病二联苗注射，20 日龄以上的家兔，每兔皮下注射 1 ml，7d 产生免疫力，间隔 20d 后再皮下注射 1.5m1,免疫 期 3—6 个月。常年每间隔四个月注射一次.发生疫情时紧急预防注射，每只 2m1。 3.1.8 严禁其他动物出入兔场，定期灭鼠灭蝇，杜绝或减少传染来源，切断一切传播途径。 3.2 治疗 阿莫西林钠（青霉素、氨苄青霉素的换代产品）肌注，10-15mg/kg,一次/d,连用 3d; 或用链霉素肌注,0.5-1IU/Kg,2 次/d,连用 5d;或用链霉素每只兔 5—10 万 IU、青霉素 2—5 万 IU,混合一次肌注，2 次/d，连用 3-4d;或用庆大霉素每兔 2—4 万 IU 一次肌注，2 次/d, 连用 3d,或用核能 2000 （主要成分为长效土霉素） 肌注 0.5m1/Kg,连用 2-3d;或用氟苯尼考 注射液肌注， 0.2—04 ml/Kg， 次/d,连用 2d;或用氟哌酸注射液肌注 0.5—1 ml 次， 次/d, 1 2 连用 5d;或用红霉素肌注，8mg/Kg,2 次/d,或口服喹乙醇，25-50mg/Kg,2 次/d,连用 2-3d; 或用氟氧沙星肌注 0.2—0.3ml/Kg，2 次/d,连用 5d；或用磺胺嘧啶肌注 0.05—0.2g/kg，2 次/d,同时配合口服土霉素，25-40mg/Kg，混在饲料喂给，1 次/d,连用 5d,或用磺胺甲基嘧 啶，内服量 0.1mg/Kg,1 次/d,肌注量 0.007g/Kg,2 次/d,连用 4d;也可在饲料中拌入 0.2%诺 氟沙星，连用 3-5d。在使用抗生素治疗的同时，可用 5%葡萄糖 10-20ml 加维生素 C1ml 静 4 脉注射。使用磺胺类药物时应加等量碳酸氢钠，预防不良反应的发生。 对慢性呼吸道症状的病兔，用青霉素、链霉素滴鼻，每毫升各 2 万 1U，每 2 次/d,连用 5d；也可用庆大霉素、氯霉素滴鼻。眼结膜炎可用链霉素眼药水滴眼，1 次 3-5 滴，两次/d； 对局部巴氏杆菌感染病兔施行外科疗法，切开成熟的脓肿排脓，用 0.1%新洁尔灭或 3%双氧 水冲洗，再涂以红霉素软膏或撒布消炎粉，或冲洗后以 0.1%利凡诺灭菌纱布引流。 急性病例，皮下注射抗出败多价血清，每千克体重约 6ml，8-10h 后再重复注射一次， 有显著疗效，但此法成本较高，只适合高价种兔。 另可选用三黄汤或双花剂中药治疗 三黄汤处方： 黄连、 黄芪各 10g 黄柏 20g,加水 500ml 煎成 20ml， 每次每只喂 10-20ml ,2 次/d,连用 3d. 双花剂处方：金银花 9g,野菊花 6g,加水 200ml 煎成 100ml，每次每只喂 10-20ml， 2 次/d,连用 3d。 对于神经症状的病兔，除用上述药物外在肌注维生素 B12 和维生素 B1 各一支，一次/d, 连用 3d。 参考文献 1.蔡宝详.家畜传染病学（第四版） （M）北京：中国农业出版社，2001. 2.杨树华.兔巴氏杆菌病的诊断及防治【J】.中国兽医杂志，2002,8（4）:55-56 3 鲍国连.兔病签别诊断与防治（M） 。北京:金盾出版社，2005:15-20 4 陶岳荣.獭兔高效益饲养技术（M）.北京:金盾出版社，2009:139-141 5 周春凤.兔巴氏杆菌病的诊治【J】 。山东畜牧兽医，2001，32（2） ：26-27 6 郭永刚.陈益，,兔巴氏杆菌的诊断【J】 。郑州牧业工程高等专科学校学报，2007， 27（1） ：18,19。 7 李桂丽.兔巴氏杆菌病的防治【J】 ，吉林畜牧兽医，2010 ，31（5） ：43,44. 8 穆传军.巴氏杆菌病的综合防治【J】 ，养殖技术顾问，2008（12）:133. 9 张达纪。兔巴氏杆菌病的防治【J】 ，中国养兔杂志，2006（3）:9-11. 10 王 刚.一起兔巴氏杆菌的诊治报告【J】 。养殖技术顾问，2011 （4） ：174 11 展建平.兔巴氏杆菌病的防治【J】.医学动物防治，2006，,22（11） ：858，859 12 刘德权.兔巴氏杆菌病的诊断与防控 【J】 .畜牧与饲料科学， 2009， （9） 30 :182-183 13 郭慧霞.一例兔巴氏杆菌病的诊断【J】.中国畜牧兽医，2010，37（7）:205-206。 5