2015年1月第22卷第1期中国中医药信息杂志·83·
祖师麻膏药质量标准的提高研究
蔺莉’一，范彬，石晓峰，毛著鸿。
1．甘肃中医学院，甘肃兰州730000；2．甘肃省医学科学研究院，甘肃兰州730050；
3．甘肃泰康制药有限责任公司，甘肃武威733000
摘要：目的提高祖师麻膏药的质量标准。方法采用薄层色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7一羟基
香豆素进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7一羟基香豆素进行含量测定，色谱柱
为AgilentEclipsePlusC柱(4．6mmX250mm，5pm)，流动相为乙腈～0．1％磷酸水溶液(15：85，V／V)，流速为
1mL／min，检测波长为327nm，柱温为30℃。结果样品中检出祖师麻甲素和7一羟基香豆素的特征斑点，图谱
斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。祖师麻甲素和7一羟基香豆素分别在0．180~I．800Pg和0．1O0～1．O0¨g
范围内与其峰面积呈良好线性关系(=O．999l，，=0．9992)，平均加样回收率分别为98．99％、101．48％，RSD
分别为1．43％、1．32％(力一9)。结论所建立的提高标准方法简便准确，专属性强，可用于该制剂的质量控制。
关键词：祖师麻膏药：质量控制；祖师麻甲素：7-羟基香豆素：薄层色谱法；高效液相色谱法
D0l：10．3969／j．issn．1005—5304．2015．01．024
中图分类号：R284．1文献标识码：A文章编号：1005—5304(2015)O1—0083—04
AStudyonQualityStandardImprovementforZushimaPlasterLINLi，FANBin2，SHIXiao—feng’。，
MAOZhu-hong5《1．GansuUniversity0fTCM．Lanzhou730004China：2．GansuAcademyofMedicalScience．
Lanzhou730050,China：3．GansuTaikangPharmaceuticalCo．Ltd,Wuwei733000,Chin
Abstract：ObjectiveToimprovethequalitystandardofZushimaPlaster．MethodsTLCwasused
todoqualitativeidenti丘cationofdaphnetinand7一hydroxycoumarininZushimaPlaster．The
contentsofdaphnetinand7一hydroxycoumarininZushimaPlasterweredeterminedbyHPLC．The
chromatographiccolumnwasAgilentEclipsePlusC18(4．6mmX250mm，5lam)，andthemobile
phaseconsistedofacetonitrile一0．1％phosphoricasid(15：85，v／v)ataflowrateof1．0mL／min．
Thecolumntemperaturewasmaintainedat30℃．andthedetectionwavelengthwassetat327nm．
ResultsCharacteristicspotsofdaphnetinand7一hydroxycoumarincouldbedetectedbyTLCfrom
thesamples，andthespotswereclearandspecificwithoutinterferencefromnegativesamples．
Thecalibrationcurveofdaphnetinand7一hydroxycoumarinwerelinearintherangesof
0．180—1．800lagand0．100—1．O0lag(r=0．9991，r===0．9992)，andtheaveragerecoveryrateswere
98．99％and101．48％，RSDwere1．43％and1．32％，respectivelyfn一9】．ConclusionTheestablished
methodappearseasytouse，accurateandspecific，andthereforecanbeusedforthequality
controlofZushimaPlaster．
Keywords：ZushimaPlaster：qualitycontrol；daphnetin；7一hydroxycoum；TLC；HPLC
祖师麻膏药(国药准字Z62020522)为国家中药保
护品种，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第
十八册)》(标准号WS3一B一3456-98)，由祖师麻提取精
制的浸膏粉和武威膏药组成，具有祛风除湿、活血止
痛之功效。其主药祖师麻药材主要来源于瑞香科
基金项目：甘肃省普通中医药科研项目(GZK一2011—81)；兰州
市科技计划(2013-3-39)
通讯作者：石晓峰，E-maiI：shixiaofeng2OO5@sina．Gom
Thyme1aeaceae瑞香属黄瑞香DaphnegiraldiZ
Nitsche、唐古特瑞香19．tanguticaMaxiam或凹叶瑞
香19．retusaHemsl的根皮和茎皮，主含香豆素类、
二萜类、木质素类、黄酮类、蒽醌类及甾醇类化学成
分，其中香豆素类化合物是祖师麻镇痛抗炎的主要
有效成分，主要包括瑞香素(7，8一二羟基香豆素，又称
祖师麻甲素，Daphnetin)、瑞香苷(祖师麻乙
素，Daphnin)、7一羟基香豆素(伞形酮，又称伞形花内
酯，7一HydroxycOumarin)、紫丁香苷(syringin)等。
·84·OhineseJournalofInformationonTCMJan．2015Vo1．22No．1
该制剂原质量标准无含量测定项目，无法有效控制其溶液，即得。
内在质量。为此，本试验对该制剂原质量标准进行提
高研究，采用薄层色谱法鉴别祖师麻膏药中的祖师麻
甲素和7一羟基香豆素，同时建立祖师麻甲素和7一羟基
香豆素含量测定的高效液相色谱(HPLC)方法。
1仪器与试药
Agilent1120型高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司)，AE260型万分之一电子天平(瑞士Mettler公
司)，CP225D型十万分之一电子分析天平(德国赛多利
斯公司)，R-200型旋转薄膜蒸发仪(瑞士BI]CHI公
司)，SHZ—D型循环水式真空泵、ZF一20D暗箱式紫外分
析仪(巩义市予华仪器有限责任公司)，SK3310HLC型
超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
祖师麻膏药样品(批号20081l14、20090810、
20111118)和阴性对照样品均由甘肃泰康制药有限责
任公司提供。对照品祖师麻甲素(批号为l10900—
200405，供含量测定用)和7一羟基香豆素(批号为
111739200501，供含量测定用)均由中国食品药品检
定研究院提供。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂
均为分析纯。
2方法与结果
2．1薄层鉴别
取祖师麻膏药，除去背衬，剪碎，精密称取2．0g
于圆底烧瓶中，加入40％乙醇20mL，回流提取30min，
过滤，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶
液。同时按祖师麻膏药生产工艺制备不含祖师麻浸膏
粉的样品，同法制成阴性对照溶液。分别称取祖师麻
甲素和7一羟基香豆素对照品适量，分别加40％乙醇，
制成每lmL含祖师麻甲素0．22mg、7一羟基香豆素
0．28mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法
[2010年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]
试验，分别吸取上述溶液各1O，点于同一硅胶G板
上，以氯仿一醋酸乙酯一甲酸一乙醚(10：l：l：3)为
展开剂，展开，1％FeC1：一[K：Fe(CN)](v／v一1：1)显色
后日光下检视。结果在供试品色谱中，与对照品色谱
相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
2．2含量测定
2．2．1色谱条件色谱柱：AgilentEc1ipsePlusC
柱(4．6INnx250mm，5pm)；流动相：乙腈0．1％磷酸
水溶液(15：85，v／v)；流速：1mL／min；检测波长：
327nm；柱温：30℃。
2．2．2对照品溶液的制备精密称取祖师麻甲素、
7一羟基香豆素对照品适量，用40％乙醇分别制成每1mL
含祖师麻甲素0．168mg、7一羟基香豆素0．100mg的
2．2．3供试品溶液的制备取祖师麻膏药1贴，除去
背衬，剪碎，精密称取1．0g置圆底烧瓶中，加入40％
乙醇20mL，回流提取2次，每次1h，合并滤液，蒸干，
残渣加40％乙醇溶解并定容于25mlJ容量瓶中，即得。
2．2．4阴性对照溶液的制备按祖师麻膏药生产工
艺制备不含祖师麻浸膏粉的阴性样品，按“2．2．3”项
下方法制备阴性对照溶液。
2．2．5系统适用性试验分别精密吸取上述对照品
溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20，注入高效
液相色谱仪测定，记录色谱图，结果见图1。可见，供试
品溶液与对照品溶液中祖师麻甲素和7一羟基香豆素
色谱峰保留时问一致，阴性对照无干扰，理论塔板数
按祖师麻甲素和7一羟基香豆素峰面积计不低于3000，
分离度>1．5。
祖师麻甲素
ublul02Ub3U
Cf，，min
注：A．对照品；B．供试品；C．阴性对照
图1祖师麻膏药中祖师麻甲素、7羟基香豆素HPLC图
2．2．6线性关系考察分别精密吸取祖师麻甲素和
7一羟基香豆素对照品溶液各50、100、200、300、400、
500至lmL容量瓶中，用40％乙醇稀释至刻度摇匀，
制得系列浓度的混合对照品溶液。精密吸取上述对照
品溶液各20，依次进样测定峰面积。以峰面积为纵
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坐标，含量(雎g)为横坐标进行线性回归，得回归方程：
祖师麻甲素一2．18028×10一0．076397，，=
0．9991；7一羟基香豆素j，=1．33254×10一
0．007724，，=0．9992。结果表明，祖师麻甲素和7一
羟基香豆素在0．180～1．800g和0．100～1．O0g
范围内进样量与峰面积积分值呈良好线性关系。
2．2．7精密度试验精密吸取新鲜配制的浓度为祖
师麻甲素、7一羟基香豆素的混合对照品溶液20乩，
按上述色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，求得祖
师麻甲素、7一羟基香豆素峰面积积分值的RSD分别为
0．97％、0．86％，结果表明仪器精密度良好。
2．2．8稳定性试验精密称取样品110g(批号
20090810)，按“2．2．3”项下方法制备供试品溶液，按
上述色谱条件，于0、2、4、6、8、10、12、24h分
别进样20，测定峰面积，求得祖师麻甲素、7一羟基
香豆素峰面积积分值的RSD分别为2．06％、2．26％，结
果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2．2．9重复性试验精密称取同一批祖师麻膏药
1．0g(批号2008114)，共6份，按“2．2．3”项下方法
制备供试品溶液，按上述色谱条件，进样20，测得
祖师麻甲素和7一羟基香豆素的平均含量分别为
0．6793、0．3838mg／g，RSD分别为1．77％、1．85％，
结果表明该方法重复性较好。
2．2．10加样回收率试验精密称取己知含量的样
品(批号20090810)约0．5g，共9份，其中祖师麻甲素
和7一羟基香豆素的含量分别为0．2816、0．1738mg／g。
按样品含量的80％、100％、120％分别加入祖师麻甲素
和7一羟基香豆素对照品溶液，按“2．2．3”项下方法制
备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20，测定峰
面积，计算含量。结果祖师麻甲素和7一羟基香豆素的
平均加样回收率分别为98．99％、101．48％，RSD分别为
1．43％、1．32％，见表1、表2。
表1祖师麻甲素加样回收率试验
表27羟基香豆素加样回收率试验
表3样品含量测定结果=3)
3讨论
目前从祖师麻的3个药源植物中共分离鉴定出
69个成分，包括香豆素类、二萜类、木质素类、黄酮
类、蒽醌类及甾醇类化学成分，其中香豆素类成分为
祖师麻药材乃至瑞香科植物的特征成分之一，也是
祖师麻镇痛抗炎的主要有效成分。为此，本试验建
立了该药品中香豆素类化学成分祖师麻甲素和7一羟
基香豆素的薄层色谱鉴别和含量测定方法。结果薄层
色谱斑点清晰，特征明显；HPLC方法简便、准确，可有
效控制其内在质量。
本试验分别考察了流动相系统、柱温、流速等色
谱条件，其中流动相曾先后通过对甲醇一水、乙腈一水、
甲醇一0．5％醋酸、甲醇一0．5％乙酸、乙腈一磷酸水
(磷酸调pH=3)，乙腈一0．05％磷酸水、乙腈一0．1％
磷酸水等系统的分离效果考察，发现乙腈一0．1％磷酸
水(15：85)为流动相时祖师麻甲素和7一羟基香豆素
两者峰形对称，均达到理想的分离效果。按照优化后
的色谱条件，2种香豆素类成分色谱峰的分离度较好，
可满足同时测定的要求。
祖师麻总香豆素具有弱酸性，在丙酮、甲醇、乙
醇中的溶解度较其他极性较小的有机溶剂高，在水中
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．86·OhineseJourna10flnformationonTOMan．曼：：
基本不溶口。因此，本试验以系列浓度的乙醇(100％、
80％、60％、40％)作为提取溶剂对祖师麻膏药进行回流
提取，结果采用无水乙醇提取的样品中，未出现祖师
麻甲素相对应的色谱峰，说明祖师麻甲素在无水乙醇
中溶解性不好；采用80％、60％、4O％2,醇为提取溶剂
时，40％乙醇对祖师麻甲素的提取率最高，而3种浓度
乙醇对7一羟基香豆素的提取率基本一致，故选择40％
乙醇作为提取溶剂。
本试验测定的3批祖师麻膏药为生产企业自主抽
样留存的样品，其祖师麻甲素、7一羟基香豆素的含量
测定结果存在明显差异，批号较远的样品中祖师麻甲
素、7一羟基香豆素的含量明显低于批号较近样品，究
其原因可能与香豆素类化合物对热不稳定的性质有
关，祖师麻甲素随温度、时间变化符合一级降解反
应n，随温度升高其有效期缩短，提示该膏药应避光、
置阴凉处贮存。
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(收稿日期：2014—06-06：编辑：陈静)
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