| 洋金花为茄科植物毛花蔓陀罗(Datum innoxia Miller)的花，主要含生物碱，为中麻药方剂中的主药，临床上治疗气管炎有效。 一、实验目的 l、通过本实验掌握生物碱的一般提取分离方法。 2、掌握氧化铝柱色谱分离莨菪碱和东莨菪碱的实验方法，从而了解柱色谱的一般实验操作技术。 3、了解东莨菪碱和莨菪碱的检识方法。 二、实验原理 洋金花中的主要化学成份 l、东食著碱(Scopolamine)又名：莨菪胺、天仙子碱mp59℃(一水合物)。 2、莨菪碱（Hyoscyamine）又名：天仙子胺mp108.5℃ 3、莨菪酸（Tropic acid） mp118℃ 4、去甲莨菪碱（Norhyoscyamine） mp142℃ 5、曼陀罗碱（Meteloidine） mp141℃ 本实验是利用游离生物碱及其盐均能溶于乙醇的性质，用乙醇回流提取总生物碱，再利用东莨菪碱和莨菪碱碱性强弱不同，与碱性氧化铝吸附力强弱不同，用氧化铝柱色谱进行分离。 三、实验内容 (一)提取总碱：取洋金花粗粉50克，置1000毫升园底烧瓶中加95％乙醇300毫升，置水浴上回流提取1小时，倾出提取液，药渣再用95％乙醇200毫升不浴回流提取30分钟，倾出提取液，药渣再用95％乙醇200毫升回流提取30分钟，倾出提取液，三次提取液合并，用玻璃漏斗过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩液加1％盐酸l00毫升使溶解，抽滤，滤液用氯仿(40，20，20毫升)萃取脂溶性杂质，酸水液用10％NaOH调至pH9一l0用氯仿萃取(60，50，30，20毫升)四次，氯仿液用无水硫酸钠脱水干燥，回收氯仿得总碱。 (二)莨菪碱与东莨菪碱的分离 这两种生物碱我们用碱性氧化铝干柱色谱进行分离，其操作步骤如下： 1、装柱：将色谱柱垂直固定在铁支架上，柱底填一块棉花，打开活塞，称取100—120目碱性氧化铝40克，经漏斗慢慢装入柱中，一边装填，一边用橡皮塞轻轻敲击色谱柱，使其装填均匀紧密，最后使吸附剂表面形成一水平面。 2、上样：将上述所得总生物碱用少量氯仿溶解，用吸管小心将氯仿溶液加在吸附剂表面上，切勿破坏吸附剂平面，为了防止平面被损坏，可剪一直径同色谱柱内径大小一样的滤纸，小心放在吸附剂平面上，或在其上面加1—2厘米厚的石英砂，把氯仿溶液加到滤纸片上或石英砂上。 3、展开(洗脱)：加样完毕，立即小心加入氯仿(也应注意防止破坏吸附剂平面)，展开洗脱，当溶剂前沿到达柱底部时，用50毫升锥形瓶收集洗脱液，并控制流速，使每分钟流出液为60一80滴，每瓶收集50毫升，更换锥形瓶，编上序号，并在柱上经常添加氯仿，使溶剂面始终高于吸附剂表面，东莨菪碱先洗脱下来，莨菪碱后洗脱下来。 4、溶剂回收，按序号分别回收溶剂后，再氧化铝薄层检查，以氯仿—丙酮—乙醇(8：2：1)展开，改良碘化铋钾试剂显色。相同部分合并。 (三)检识反应及薄层检查 1、生物碱沉淀反应 分别取东莨菪碱，莨菪碱少量，置白瓷板中蒸发到干，加2滴稀HCl溶解， 分别加以下生物碱沉淀试剂： (1)碘—碘化钾试液 (2)改良碘化铋钾试液 (3)苦味酸试液 观察结果： 2、Vitali反应：分别取东莨菪碱和莨菪碱少量，置于白瓷板中，加发烟硝酸5滴，于水浴上蒸干，放冷后，加10％KOH乙醇溶液2—3滴，观察颜色变化，并加以解释。 3、薄层色谱 吸附剂：碱性氧化铝150一180目，干法铺板。 展开剂：氯仿—丙酮—乙醇(8：2：1) 样品：东莨菪碱氯仿溶液 莨菪碱氯仿溶液 东莨菪碱标准品 莨菪碱标准品 显色剂：改良碘化铋钾，喷洒 四、实验说明及注意事项 l、装柱还可采用湿法：将洗脱剂加到吸附剂中，搅拌成稀糊状，加到层析柱中，使吸附剂依重力自然下沉到柱底部，打开活塞使洗脱剂流出，但要保证溶剂表面始终高于吸附剂表面。干法装柱操作简便、迅速、不受洗脱剂的限制，但柱效不高。 2、柱色谱和薄层色谱用的氧化铝要注意活度，一般Ⅱ—Ⅲ级即可，活度不够就不能将样品中成分分开。 |
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