FITC标记抗体流程

FITC标记抗体流程

（1）将待交联的蛋白（浓度31mg/ml）对交联反应液透析三次4 ℃，至pH＝9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。

（2） 将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/ml。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

（3） 按P:F（蛋白质：FITC）=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4 ℃反应8 hr。

（4） 加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L， 4 ℃终止反应2 hr。

（5） 将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

（6） 交联物的鉴定

蛋白浓度(mg/ml) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4

F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ]，该值应介于2.5 ~ 6.5之间。

（7） FITC交联的蛋白应置于pH7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃暗处保存。