“沃丰素”和“靓果安”对猕猴桃树相关酶活性的诱导作用刘欢赵磊西北农林科技大学植物保护学院陕西是我国的果业大省，猕猴桃产业在我省发展迅速
，2009年我省种植面积已达60万亩，占全国总栽种面积的30%，陕西省政府认为，猕猴桃是一个具有竞争优势的朝阳富民产业，规划到20
15年，全省猕猴桃面积发展到100万亩，产量达80万吨，再形成一个农民增收的支柱产业。目前生产上，猕猴桃溃疡病发生危害严重，果园病
株率平均达40%左右，部分重病区病株率达70%以上甚至导致毁园，猕猴桃溃疡病病株率普遍达到30%以上，严重果园达到80%以上，很多
果园因死树率太高而导致农民砍树毁园，损失非常严重，给果农带来了巨大的损失，已成为制约陕西省果业生产发展和出口的重要因素。诱导抗性是
利用致病菌、弱毒小种接种或化学物质激发植物的防卫基因,从而达到防病的效果,在实践上已有成功应用的报道,例如水杨酸既是一种极具
代表性的植物抗病蛋白诱导剂,也是植物体内普遍存在的一种酚类化合物,能诱导植物提高抗病性。本研究通过大田试验,探讨沃丰素和靓果
安对猕猴桃溃疡病的抑菌作用,并从酶学途径研究了其抑菌机理,以期为猕猴桃溃疡病防治提供可靠药剂。1材料与方法1.1供试药剂和材
料靓果安和沃丰素由潍坊奥丰作物病毒防治有限公司提供。两年生的海沃德品种猕猴桃苗，在西北农林科技大学植病试验站进行种植。1.2供试
病原菌猕猴桃细菌性溃疡病原菌Pseudomonassyringaepv.actinidae,由陕西﹒杨凌田间采集分离得到并保
存于西北农林科技大学植物病毒实验室。1.3材料处理药剂处理方法：采用沃丰素200倍液灌根，同时辅以靓果安200倍液喷雾沃丰素和靓果
安治疗组（先接菌后处理）沃丰素和靓果安预防组（先处理后接菌）；发病对照（只接菌）；健康对照；病原细菌的接种方法采用针刺法，接菌
后保湿。在不同时间（1、2、4、7、9天）随机取各个处理的同一叶位叶片，保存于-40℃冰箱。1.4酶液提取和酶活性测定方法PPO
酶液提取：称取叶片1g，在冰浴中研磨充分，加入2ml蒸馏水，离心前在-20℃冰箱预冷2分钟，然后高速离心12000r/min,2m
in,取上清液置4℃冰箱中保存。PPO酶活性测定：1.在小试管中依次加入0.02M邻苯二酚溶液1.5ml,0.05MpH6.8磷
酸缓冲液1.5ml，酶液0.01ml。另取一小试管，不加酶液，作为对照。在30℃下反应2min,398nm波长下测OD值。POD
酶液提取：称取叶片1g，加20mmol/KH2PO45ml,液氮研磨，以4000r/min离心15min，收集上清液保存在冷处
，所得残渣再用5mlKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清保存于4℃冰箱中。POD酶活性测定：取光径1cm的比色杯2只，于一只中
加入反应混合液2.4ml，KH2PO40.6ml，作为校零对照，另一只加入反应混合液2.4ml，提取保存的酶液0.6ml，470
nm波长下测OD值。重复三次。反应混合液：100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）50ml，加入愈创木酚28μl与磁力搅拌器上
加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%H2O219μl，混合均匀，保存于4℃冰箱中。2结果与分析2.1“沃丰素”和
“靓果安”对猕猴桃叶片PPO和POD活性的影响处理组和预防组猕猴桃叶片的PPO活性均于第4天达到最高值，之后开始逐渐降低；
从PPO相对值来看,经过沃丰素和靓果安处理后，猕猴桃叶片PPO酶活性均高于健康对照和发病对照，而预防组PPO酶活性均表现为最高
，猕猴桃抗病性可能更好。对于POD而言,第1天各处理叶片的POD活性水平相差不大,之后预防组叶片的POD活性一直在升高
,至第7天达到最高值,之后有所下降;治疗组叶片的POD活性在第2天达到最低，之后又缓慢上升，9天内变化很小，几乎均保持在
同一水平。从POD相对值来看,经过沃丰素和靓果安处理后，第2天之后猕猴桃叶片POD酶活性均高于健康对照和发病对照，而预防组PO
D酶活性最高。3讨论POD直接参与细胞壁的木质化和角质化、生长素代谢、受伤组织的栓化愈合及对病原的防御。PPO是含铜离子的酶
,当细胞受轻微破坏时某些细胞结构解体,PPO与底物接触发生反应,将酚氧化成棕褐色的醌,醌则对病原菌有毒杀作用。本研究结果
表明,经过沃丰素和靓果安处理后,均能提高猕猴桃叶片中PPO和POD的活性,而PPO和POD与植物的抗性密切相关,说
明经过沃丰素和靓果安处理后可以提高猕猴桃抗溃疡病的能力。沃丰素和靓果安属中药制剂,对动物低毒,对作物无毒副作用,可以用于绿色、
无公害农作物与园艺作物的生产。该药物在防治猕猴桃溃疡病的生产试验中初步取得了良好效果。建议生产上对溃疡病以预防为主，本研究结果显示
,沃丰素和靓果安在防治猕猴桃溃疡病中有很大的应用潜力。附表（测试数据均为3次重复处理平均值）：天数PPO测定POD测定健康对照发
病对照治疗组预防组健康对照发病对照治疗组预防组10.08270.09030.11310.13240.08730.10940.121
70.103120.04390.0690.08230.12110.09470.09350.11440.13340.06590.08
120.12610.18370.09240.11360.13270.15470.07060.08920.11690.16920.10240.12010.13040.196390.06830.09210.12370.16420.09580.09750.12510.19152015.11.3 |
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