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western blot曝光得到的图片,到底是要分析灰度值还是密度值?

 kuakizhang 2016-06-22

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一般WB的分析都是测量积分光密度,也就是IOD。这个值一般IOD=area x density(mean)

......


一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析
    1、File——》open 打开WB片子
    2、把图片转化成灰度图片 image——》type——》8-bit
    3、消除背景影响 process——》subtract background 选择50基本可以
    4、设置定量参数 analyze——》set measurements,点击面积,平均密度和灰度值及Integrated Density
    5、设置单位 analyze——》set scale ,在“unit of length”的方框里输入“pixels”
    6、把图片转换成亮带,Edit——》invert
    7、选择Freehand Selection,尽量把条带圈起来,点击键盘m,出来IntDen灰度值
    8、复制数据IntDen进行分析


二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析
    1、File——》open 打开WB片子
    2、如条带不正,需修正
    image——》transform——》rotate  调节angle值,直到条带水平为止
    3、选中矩形选项,圈中第一个条带,然后 analyze——》gels——》select first lane(快捷键ctrl+1),然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上,analyze——》gels——》select second lane(快捷键 ctrl+2),最后analyze——》gels——》plot lanes
    4、选中直线工具,将开口的波峰关闭
    5、选中魔棒工具,点击波峰可以显示波峰下面积,即条带的密度值
    6、以第一个数值为基数,其他数值与第一个数值的比值为相对密度


这是我在网上查到的,用ImagJ分析WB条带的方法


到底要选第一种呢?还是第二种呢?


                                                                                                                                                                                                    

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