关注，其免疫、降糖等活性与其所含单糖、糖醛酸、蛋
白等成分结构有密切的关系…。本文对律草纯化
多糖HSW1-4进行气相色谱等测定单糖组分，采用
斜率校正系数法分析各纯化多糖中的中性糖含量，
并测定糖醛酸含量及蛋白质含量，以便进一步研究
獯草多糖的化学结构和药理活性。
1材料与仪器
1．1材料与试剂
蓰草采于镇江市郊，经本院段国峰副教授鉴定
为桑科植物薇草Humulusscandens(Lour．)Merr．的
全草。纯化多糖HSW1一HSW4的制备：药材脱脂后，
药渣水提醇沉，沉淀离心后，脱蛋白、透析、冻干，得
粗多糖HSw。HSW经DEAE一52柱、SephadexG-
100柱的不同浓度NaC1液洗脱，依次得主要纯化多
糖HSW1-4，经HPGPC检测均为单一对称峰；HSW1—
4得率分别为5．25％、25．30％、15．10％、7．85％。
鼠李糖Rha、阿拉伯糖Ara、木糖Xyl、甘露糖Man、葡
萄糖Glu、半乳糖Gal、间羟基联苯、糖醛酸，sigma公
司；考马斯亮兰试剂盒，南京建成生物研究所；其他
2实验方法
2．1中性糖含量测定
2．1．1HSW1-4中单糖组分的分析GC条件：DB一
530000mm×0．53mm石英毛细管柱；载气：高纯氮
气；检测器：FID；程序升温：100~C(5℃／min)一
190oC，190oC(4oC／min)一240℃(10min)；汽化温
度280oC；检测器260oC。
HSW1-4安瓿冲氮封口酸水解后，离心，上清液
冻干，即得水解糖样。采用糖腈乙酰法_2制备各水
解糖样及标准单糖的气相衍生物，内标为肌醇，注入
色谱仪，分析样品中单糖的种类，并根据峰面积求得
各单糖的摩尔比。
2．1．2各单糖标准曲线的制定及样品的测定结
合气相分析的结果，采用改良的硫酸一苯酚法测
定所含单糖的吸收度。以标准单糖浓度C(g／m1)
为自变量，吸光度A为因变量作线性回归，分别求
得葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、木糖
的标准曲线。
精密配制为200g／ml样品液，测定吸光度A，
基金项目：中国药科大学校青年基金项目(项目编号：E0425)。
·59·
JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE
按校正系数法结合标准方程计算浓度。
2．2糖醛酸含量的测定
问羟基联苯法测定吸收度，以标准糖醛酸浓
度C(g／m1)为自变量，吸光度A为因变量作线性
回归，求得工作曲线回归方程。精密配制为200Ixg
／ml样品液，测定吸光度A，按标准工作方程计算浓
度。
2．3蛋白质含量的测定
Bradford法测定各管的吸收度A。计算公
式：蛋白含量=(A样品一A空白)×标准浓度／(A标准
一A空白)，其中标准液浓度为0．615g／L。
3结果讨论与小结
3．1中性糖的含量测定
3．1．1气相色谱分析结果
2
l履
图1标准单糖乙酰化物GC
Rha2．Ara3．Xyl4．Man5．Glu6．Gal7．Inosito1)
“
图2律草多糖中各单糖摩尔百分数
(系列A：ara、B：rha、C：mfln、D：gal、E：glu)
标准单糖的GC图谱见图1，参照标准品的保
留时间及相应因子，结果表明各纯化多糖中的单糖
主要如下：HSW1由Glu、Gal组成，摩尔比为1．00：
0．21；HSW2由Rha、Ara、Man、Glu、Gal组成，摩尔比
0．73：0．99：0．69：0．80：1．00；HSW3由Rha、Ara、
Man、Glu、Gal组成，摩尔比为0．51：0．31：0．48：1．
00：0．45；HSW4由Man、Gal组成，摩尔比1．00：
0．42。经计算各样品的摩尔百分数见图2。
3．1．2单糖的测定及数据处理单糖在0—180
g／ml范围内，吸光度和含量成良好的线性关系。
各标准方程如下：
Ym萄糖=0．0054X一0．0023，R=0．9994，
y甘露糖=0．0068X+0．0351R：0．9978
y半乳糖=0．0041X+0．0263，R=0．9981，l，术特
=0．0051+0．0119R=0．9993
拉伯糖=0．0049X+0．0277，R=0．9976，
Y嗣李糖：0．0044X+0．0129R=0．9971
可得葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、
半乳糖的校正系数K分别为1．00、0．81、0．91、
1．26、0．94、0．76，结合各多糖中单糖的摩尔百分比
再计算出斜率系数(K=2Kn，a为摩尔百分
数)；各样品的吸收度，均见表1。
由于律草多糖中性糖多为己糖，再结合分子量
等的分析J，转化系数f取0．90。参照葡萄糖计算
方程y=0．0054x一0．0023得：C=(A+0．0023)
f／0．0054k’，计算出各多糖的中性糖的含量见
表2。
表1斜率系数及吸收度
表2律草多糖含量分析(质量浓度g／ml、百分比浓度％)
样品中性糖含量糖醛酸含量蛋白质含量
质量浓度百分比浓度质量浓度百分比浓度质鼍浓度百分比浓度
HW184．49443．22192l
HSW2504252742371125113
HSW3393I9．6797398145915
1!：：翌：丝：!：1
3．2糖醛酸含量的测定
糖醛酸标准曲线：Y=0．0077X一0．0144，R=
0．9991样品的吸收度见表1，样品中糖醛酸的含量
见表2。
3．3蛋白质含量的测定
空白管吸收度0．320，标准管吸收度0．438，样
品吸收度见表1，样品中蛋白质的含量见表2。
3．4小结与讨论
由于獯草多糖为杂多糖，多糖水解后会产生的
不同的单糖参与硫酸一苯酚法的显色反应，故在中
性糖的含量测定中，当以某一单糖的标准曲线计算
含量时，需加入矫正参数(、f)进行计算；其中可通
过各单糖曲线的斜率及多糖中单糖摩尔百分比求
出，对于多聚己糖转化系数，由于蓓草多糖经分析为
己糖，故f取0．90。蓰草多糖经分离纯化，得四种主
要纯化多糖HSW1-4，从表2结果来看HSW1-4中的
中性糖含量越来越低，糖醛酸等酸性基团依次增多，
·60·
一一谶
_l__㈡㈡川一
江西中医药2011年8月第8期总42卷第344期
映当归南枣片的内在质量。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100四元低压梯度
泵系列，Agilentl100化学工作站，DAD二极管阵列
检测器。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定
所)；水为重蒸馏水；乙腈，甲醇为色谱纯；其它试剂
均为分析纯。当归南枣片(江西荣裕药业有限公
司)。
2方法与结果
2．2．1供试品溶液的制备取重量差异项下当归
南枣片20片，除去薄膜衣，研细，取0．5g精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密
塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率25KHz)
20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．2．2对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照
品10．0mg，置100ml棕色量瓶中，加70％甲醇使溶
解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
蛋白质含量不一，这与多糖在弱阴离子交换树脂(2)：229-231-
DEAE上的洗脱顺序吻合。尽管在对多糖预处理过[]V一R，V一R，wardiAH·。parai…“i。。。
程中，进行了脱蛋白，但考虑到可能含有微量的蛋白p01ofne
。
utra
h
l
，：c。hro．m，a1t9o7gr3ap，h7y7：a2n2d：：n“协
糖，故采用考马斯亮兰法(Bradford法)进行了蛋白[3]董群
，郑伊丽，方积年．改良的苯酚_硫酸法测定多糖和寡糖的研
质的测定。究[J]．中国药学杂志，1996，31(9)：550—552．
本文初步搞清了荇草多糖HSW1-4的一些理化[4]BlumenkrantzN，Asboe—HansenG·Newmeth。dforquantitativede。
尊竺：及中性毽：譬、堂宴term君in庄at，io毛n开of荣uro，“丁ic家aci波d，[等J]．．‘提54纯：4禽84结-4核89菌．分析结果提示HSWI~可能是蛋白杂多糖，有关进,素iztz蛋~a白：；…一,2007,41(6…)：9………
一步的结构分析及活性研究正在进行中。[6]段国峰，李宝军，翟松涛，等．律草多糖的分离纯化及组成分析
参考文献[J]．海峡药学，2006，18(5)：85—87．
[1]高小荣，刘培勋．多糖构效关系研究进展[J]．中草药，2004，35(收稿日期：2011-07-29责任编辑：曾文雪)
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