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如何用photoshop计算蛋白条带的灰度值?

 微笑如酒 2016-08-25

在western blot或者DNA电泳条带中,经常需要半定量统计条带的灰度值,比较常用的是用ImageJ这个软件来统计,但是如果不熟悉操作很容易得出错误的统计数据。本文从原理到操作告诉你如何用photoshop来统计灰度值




首先进行实际操作之前我们先来理解下什么叫做灰度值


如上图所示,灰度值就是从黑到白渐变过程中对应的数值。0代表黑色,255代表白色。


上图所示正常western blot条带和反向之后的条带。 上图的箭头分别指出了条带以及背景对应的区域。在正常条带中条带的值约为20,背景值为80;在反向图片中,条带的值 约为200,背景值为130。我们习惯了条带越粗亮灰度值越大,因此我们一般是对其进行反向之后测量。


在这里一定要去掉背景,至于为什么要去掉背景,在此不多说了(视频教程里将详细介绍)请看下面图片:




那么接下来开始我们今天的教程:

  1. 打开图片,因为图片有点倾斜,我们需要将其摆正,有两种方法进行拉直,第一种是将图层旋转(Ctrl+T,然后旋转至其摆正),另外一种是使用标尺工具,在左边快捷栏中安卓吸管工具不放,选择标识工具,然后在条带上面从左边点按住鼠标不放一直拖动到最右边,最后点击拉直图层即可。




  2. 点击菜单栏的“窗口”,选择直方图,弹出下面面板



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