25羟基维生素D2偏低

你遇到过吗？

今天化验结果出来了，25羟基维生素D2偏低，大夫让打针，有没有一样的宝宝？这种情况必须要打针吗还是吃药也可以？

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25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3是哈？

维生素D(vitamin D)是一类脂溶性维生素，属固醇类衍生物，是包括人类在内的高等动物生命必需的重要营养素。维生素D主要的生理功能是调节体内钙、磷代谢并维持血浆钙、磷水平稳定，参与个体牙齿和骨骼的正常生长发育。维生素D主要包括五种化合物， 分别为维生素D1、D2、D3、D4和D5，家族成员中最重要的是D2和D3，通常所说的维生素D即指这两种形式。

血清25羟维生素D水平也可作为维生素D营养状况的客观指标，维生素D与健康的定量关系研究发展迅速。目前判断成人维生素D营养状况的标准为：维生素D缺乏为血清25-(OH) D水平<50nmol/L（1 nmol/L = 0.4 ng/ml）、不足为50～75nmol/L、充足为>75nmol/L。

血清25羟维生素D在调节激素分泌、调节免疫功能、调节细胞增殖和分化等方面的临床意义。

维生素D过多常由于过量摄入维生素D引起。其临床表现为疲劳、无力、食欲缺乏、恶心、呕吐、腹泻等，严重者可有生长发育迟缓、高热、脱水、癫痫发作等，可引起肾、脑、肺、胰腺等脏器有异位钙化灶和肾结石。 

维生素D作为一种免疫调节剂，既可预防及治疗疾病，又不会引起广泛的免疫抑制作用，并且在动物实验已经证实其对MS有一定的预防作用。Munger等对美国7万军方人员的研究发现，MS患者脱髓鞘的发生与维生素D3水平的季节性波动一致，且口服维生素D3后可减少MS的发生。在一项长达20年，以18.7万名美国女性为对象的研究发现服用含有维生素D的复合维生素片的人发生MS的比例比不服用维生素片剂的妇女低40%。晒太阳是人类产生维生素D的主要方法，研究人员发现离赤道越远的地方罹患MS的人数越多。在美国一项大型的研究中也发现，居住在较高纬度地区的妇女，诊断出MS的比例是居住在南方地区妇女的3.5倍。

方法学	特点
放免法RIA	灵敏度高，特异性强，精密度好，仪器设备条件要求不高，是基层单位对超微量物质测定的主要手段，但存在放射污染的潜在风险。
化学发光法CLIA	操作简单快速，  无同位素污染等 优点，容易自动化。
电化学发光法    ECL	选择性好、灵敏度高、分析速度快。
LC-MS/MS液相色谱-串联质谱	灵敏度，特异性准确性都高，但操作程序较复杂  需要昂贵的特殊仪器。
色谱法-HPLC	灵敏度，特异性，准确性都较高，但设备较贵，标本前处理过程复杂。
酶联免疫法ELISA	设备和操作简单，无污染但敏感性和特异性较 差

本文推荐了最先进的分析技术液相色谱串联质谱法进行测定。

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由于测定方法的样品来自体液血液或尿液，因此样品前处理是一个技术活。最近ISOLUTE? PLD 除蛋白和磷脂板比传统的蛋白沉淀技术，ISOLUTE? PLD 大幅改了提取清洁度。

第一步：破碎

第二步：混匀

第三步：洗脱

放大PLD

洗脱目标物

正压3psi或-2bar真空下约5分钟，如果样品含有高颗粒物可以适当增加压力或真空条件。

萃取后处理

使用Biotage? SPE Dry (40 °C ，40 L/min)或TurboVap? (40°C ，1.0 bar). 空气或氮气气流吹干萃取液。

定容

用100uL30/70甲酸铵（2mM）100μl，0.1%甲酸水/甲醇定容。

UPLC的条件

仪器：Waters Acquity UPLC 

质谱的条件

Quattro Premier XE三重四极杆，ESI电喷雾离子源

色谱图

三分钟完成25-羟基维生素D2和D3分析，如图。

回收率

使用血清和处理过的血清，在不同浓度2-00ng/mL下测试，高重现的回收率>70%。如下图。

PBS/BSA校正曲线

使用PBS/BSA，在不同浓度1-100ng/mL的校正曲线测定25-羟基维生素D2和D3，具有非常好的相关系数，r2 > 0.99。图略。

Chromsystems 校正曲线

使用已经校正的血清标准（采购自Chromsystems），在0-69ng/mL的浓度下，测定25-羟基维生素D2和D3，具有非常好的相关系数，r2 > 0.99。图略。

DEQAS外部质量评估方案

本方法最后经5个DEQAS血清样品萃取测试，一起与Chromsystems校正因子进行优化。DEQAS标准至少80%的结果落在所有实验室修剪平均的 或-25%以内。图略。

订货信息

货号：918-0050-P01 ，ISOLUTE? PLD 固定孔板 数量：1个

货号：121-9600 Biotage  VacMaterTM-96 样品处理歧管 数量：1个

货号：PPM-96，Biotage PRESSURE 96 正压歧管，数量：1个

货号：SD-9600-DHS-EU，Biotage? SPE Dry样品浓缩系统220/240V 数量：1个

货号：C103264，TurboVap  96样品蒸发仪220/240V 数量：1个

本文来自：Application Note AN842.V.1：Extraction of 25-hydroxy Vitamin D from Serum Using ISOLUTE?  PLD Prior to LC-MS/MS Analysis 

VA和VE的测定

2分钟固萃5分钟质谱分析，24小时竟然......

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关于绿绵科技

北京绿绵科技有限公司(简称：绿绵科技)以体现客户服务最高价值为宗旨，以专业精神和技能为广大实验室分析工作者提供样品前处理、样品制备及分析、实验数据精确分析和管理的全面解决方案，致力于协助客户提高分析检测的效率和水平。主要代理产品：LabOS实验室运营系统、Lumtech半制备/制备液相色谱、MassWorks准确质量测定及分子式识别、New Objective纳喷离子源、GE生命科学设备、凝胶净化前处理、在线固相萃取、浓缩仪、氮吹仪、电喷雾离子迁移谱、全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪、实验室氮气氢气空气发生器、Agilent中端气相液相、生物耗材、Buffer缓冲液、固相萃取耗材。

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