高中生物基础知识点(问题版)

5．当探究温度对果胶酶活性的影响时，哪个因素是变量，哪些因素应该保持不变？ 提示：温度是变量，应控制果泥量、果胶酶的浓度和用量、水浴时间和混合物的pH等所有其他条件不变。只有这样才能保证只有温度一个变量对果胶酶的活性产生影响。

五、探讨加酶洗衣粉的洗涤效果

知识点

1、常用酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶。其中最广泛、最有效的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。

2、温度、PH、表面活性剂都会影响酶的活性。

3、几种酶的洗涤原理：

①蛋白质 蛋白酶 多肽——— 氨基酸

②脂肪 脂肪酸 甘油+脂肪酸

③淀粉 淀粉酶 麦芽糖

④纤维素 纤维素酶 葡萄糖

4．普通洗衣粉的化学成分：

表面活性剂，水软化剂，碱剂，漂白剂，增白剂，香精和色素，填充剂

5．洗涤效果的判断方法：

污渍已消失，颜色变浅，面积缩小

6.本课题下的三个子课题分别为：

①普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果。

②不同温度对加酶洗衣粉的洗涤效果影响。

③不同种类的加酶洗衣粉对同一污渍或不同污渍的洗涤效果的比较。

问题：1．查阅资料，看看普通洗衣粉中包含哪些化学成分？提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性剂、水软化剂、碱剂、漂白剂等成分，有的洗衣粉中还含有增白剂、香精和色素，以及填充剂等。

2．在本课题中你打算使用什么方法和标准判断洗涤效果？提示：可在洗涤后比较污物的残留状况，如：已消失、颜色变浅、面积缩小等，最好能进行定量的比较。

六、酵母细胞的固定化

知识点：

1．高果糖浆是指果糖含量为42%左右的糖浆。高果糖浆的生产需要使用葡萄糖异构酶，它能将葡萄糖转化。

2．固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。包括包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）和物理吸附法。

3．酶适合采用化学结合和物理吸附法固定化，细胞多采用包埋法固定化，因为细胞个大，而酶分子很小，容易从包埋材料中漏出。

4．固定化酶的优点是既能与反应物接触，又容易与产物分离，同时固定在载体上的酶还可以反复利用。

5．固定化细胞的优点是成本低，操作更容易，对酶活性影响小，易回收，但由于大分子物质难以自由通过细胞膜，应用受到限制。

6．包埋法固定化酵母细胞常用载体有：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺。

7．溶解海藻酸钠，最好用小火间断加热的方法，否则会发生焦糊。

8．固定化酵母细胞前必须先活化干酵母。

9．加入已活化的酵母细胞前，必须将溶化好的海藻酸钠冷却至室温。

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10．海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；过低则形成的凝胶珠包埋的酵母细胞数目少，影响实验效果。

11．如果制作的凝胶珠颜色过浅，呈白色，说明海藻酸钠浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠浓度偏高，制作失败。

12．直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点如下表所示。

七、DNA的粗提取与鉴定

（一）DNA粗提取的原理

1．NaCl浓度在0.14mol/L时，DNA溶解度最低，高于或低于0.14mol/L时，溶解度增大。

2．利用DNA不溶于酒精，但某些蛋白质可溶于酒精，可以将DNA和蛋白质分离。

3．利用DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同，可以达到分离DNA和蛋白质的目的。

（二）DNA鉴定的原理

在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺水浴加热会变蓝。

（三）去除滤液中杂质的方法

1．利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，去除杂质。

2．利用嫩肉粉中的木瓜蛋白酶分解蛋白质。

3．利用DNA和蛋白质对高温耐受性不同，在60~75℃恒温水浴

(四)、 利用鸡血粗提取DNA 的步骤：

1、破碎细胞，释放DNA。（此过程中加蒸馏水、快速搅拌的目的是使鸡血细胞破裂）

2、溶解细胞核内DNA。

3、DNA析出。（此过程中加蒸馏水的目的是使DNA析出）

4、DNA初步纯化。

5、DNA鉴定。

(五)、 利用菜花粗提取DNA的步骤：

1、取材。2、研磨。3、过滤。4、沉淀。

（六）实验注意点

1、 实验材料：鸡血细胞或花椰菜。选用鸡血细胞原因，一是鸡血细胞DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。

2、 防止鸡血凝固的方法是加入一定量的浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液。

3、 实验过程中最好选用塑料烧杯、试管，（DNA易吸附于玻璃容器）

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4、 粗提取洋葱DNA过程中加入洗涤剂和食盐的作用：洗涤剂是些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐的主要成分是 NaCl, 有利于DNA 的溶解。

问题：1．为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

2．加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

3．如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？

答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

4．此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？

答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。

5．为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

6．方案二与方案三的原理有什么不同？

答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离

八、PCR技术

PCR技术的全称：多聚酶链式反应。

PCR技术根据原理：DNA复制。

PCR技术的步骤：变性、复性、延伸。

DNA复制方向

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方向

′方向（接着引物的3′端开始）

引物的本质：一段能与DNA母链互补配对的20—30个核苷酸构成的DNA或RNA。

PCR技术三个步骤中所需温度分别是：变性（95℃）、 复性（55℃）、延伸（72℃）。 在PCR循环之前，需进行一次预变性，目的是增加大分子模板DNA彻底变性的概率。 PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前高压灭菌。

PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存，使用前放在冰块上缓慢融化。 在微量离心管中添加反映成分时，每吸取一种试剂后，枪头都必须更换。

DNA含量测定原理：DNA对260nm的紫外线有强烈的吸收量。

DNA含量测定方法: P63

DNA连接酶和DNA聚合酶的作用区别：DNA连接酶一般作用于基因工程中，将一段DNA与另外一段DNA连接起来。DNA聚合酶是将一个个的脱氧核苷酸连接起来，他们的作用点都是形成磷酸二酯键。

PCR反应中的目的片段一般以2n的方式积累。（n为反应循环次数）

九、血红蛋白的提取和分离

1．不同种类蛋白质分离的原理是蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小，所带电荷的性质和多少，溶解度，吸附性质和对其它分子的柔和力。

2．凝胶色谱法分离蛋白质的原理是：不同蛋白质相对分子质量大小不同（分子质量小的蛋白质易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度慢，分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动较快。

3．缓冲溶液的作用：在一定范围内，抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持溶液pH基本不变。

4．电泳：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，

蛋白质等许多生物大分子都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

5．常用的电泳方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定蛋白质分子量对蛋白质纯度进行鉴定时，通常使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。

6．蛋白质的提取和分离的步骤：样品处理，粗分离，纯化和纯度鉴定。

7．红细胞洗涤的目的是去除杂蛋白，以利于分离纯化，洗涤时用5倍体积的生理盐水，重复三次。洗涤次数，离心速度和离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白，离心速度过高和时间过长，会使白细胞等一同沉淀。

8．血红蛋白和释放：红细胞液中加入蒸馏水和甲苯，置于磁力搅拌器上搅拌10min，红细胞破裂，释放出血红蛋白。

9．血红蛋白混合液高速离心后分为四层：第一层为甲苯层；第二层为白色薄层固体（脂类物质）；第三层为血红蛋白的水溶液；第四层为暗红色杂质沉淀物。

10．透析：指用半透膜去除样品中分子量较小的杂质。

11．凝胶色谱柱装填时，不能有气泡产生，一旦发现气泡，必须重装。

12．蛋白质分离时，在洗脱过程中，红色区带均匀一致移动，说明色谱柱制作成功。

13．样品加入和洗脱过程中①加样前，先打开色谱柱下端的流出口；②待缓冲液下降到与凝胶面平齐，关闭出口；③加样后，打开出口，待样品完全进入凝胶层后，关闭出口；④连接好缓冲液洗脱瓶后，再打开下端出口，进行洗脱。

14．洗脱过程中，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml收集一管，连续收集。

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