一、 螺旋体的分类、寄生部位 螺旋体的分类及传播方式
二、 生物学特性 梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种,人是其唯一宿主。直径0.1—0.15μm,全长7--8μm。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。 梅毒螺旋体主要有两种抗原:1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原,与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原,可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原,可刺激机体产生反应素,其与牛心肌的心脂质抗原发生反应,此法敏感性高,但有假阳性。 梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱,离体后1—2小时即死亡,对热和干燥特别敏感,在体外干燥环境下1—2小时或加1.5℃经1小即死亡。血液中4℃放置3天可死亡,因此4℃血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感,1%--2%石炭酸内数分钟就死亡。 梅毒的免疫属感染性免疫,有梅毒螺旋体感染时才有免疫力,一旦螺旋体被杀灭,其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应,体液免疫中有两种抗体:一种是梅毒特异性抗体,主要是IgG、IgM,对螺旋体有制动作用,当有补体存在时,可将其杀死和溶解,对机体的再感染有保护作用。另一种是抗脂质抗体的反应素,为IgG和IgM的混合物,对机体无保护作用。 三、 送检标本和检验方法 Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液,Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对Ⅰ期梅毒末期以后(大约感染3—4周以后)的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。 检验方法: 1、 显微镜镜检 渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合ⅠⅡ期梅毒的检查。(现已经不常用) 2、 血清学试验 包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类 1) 非螺旋体抗体试验(NtrAT) 用正常牛心肌脂质作为抗原,测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。 2) 密螺旋体抗体试验(TrAT) 采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原,测定血清中梅毒螺旋体特异抗体,特异性强,可用作梅毒证实试验。 试验方法分类
四、 方法学比较 1. 非螺旋体抗体试验(NtrAT) 这类方法敏感性高,其抗体滴度与病变活动性有关,病灶出现后1-2周就可测出反应素,Ⅰ期梅毒阳性率约为70%,Ⅱ期梅毒阳性率可达100%,Ⅲ期梅毒阳性率较低,先天性梅毒阳性率可达80%-100%,但此类试验特异性不高,常有假阳性反应。因此,在分析结果时应结合病史和临床症状,并做密螺旋体抗原试验加以确诊。 2. 密螺旋体抗体试验(TrAT) 1) TPHA(梅毒螺旋体血凝试验) 是一种间接血凝试验,以SRBC为载体,将梅毒螺旋体Nichols株,经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原,致敏SRBC,加入待检病人血清作间接血凝试验,具有敏感性高,快速,简便,易于观察等特点。 2) TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)与TPHA基本相同。 3) WB(免疫印迹试验) 是分子水平的试验,本法综合了SDS-PAGE的高分辩力和ELISA的高特异性和敏感性,对梅毒的确诊,尤其对早期梅毒的确诊具有特殊的价值,对二期,三期梅毒的诊断率很高。 4) FTA-ABS(荧光密螺旋体抗体吸收试验)为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高,是Ⅰ期,Ⅱ期梅毒首先出现阳性反应的血清学试验,且病人经药物治疗后,反应仍不转阴,可用于确诊但不能用作疗效评价。 密螺旋体抗原试验的特异性虽强,但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病,也可有1%生物学假阳性存在。因此,这些试验的结果的判定,仍需结合临床资料来分析。 梅毒血清学试验假阳性的原因
根据后附论文“梅毒实验室诊断及评价”的资料显示RPR阳性率为94.2%,TRUST阳性率为93.0%, 4种非特异性检测方法敏感性均在95%左右。虽然从数据中看到用进口RPR试剂在对照血清组有10例的假阳性(占8.7%),看似较高。但其准确性也有91.22%,也是令人较满意的试剂。国产的RPR和TRUST在各项指标上的差异无统计学意义。因TRUST有操作简单,用时短,结果容易观察等特点被临床实验室广范的接受(卫生部门推存用RPR或VDRL)。 RPR、TRUST试剂对不同血清标本的检测结果
TPPA法对梅毒患者诊断敏感性为83.72%,TP-ELlSA法敏感性为87.21%,WB法敏感性为100%。3种特异性抗体检测法特异性均为100%(即假阳性率为0%)。在三种方法的对比中可以看出WB法是最好的,但其操作复杂费时,对实验设备和实验条件要求较高等客观条件约束,因此在临床实验室中运用较少。 3种特异性抗体检测方法对不同血清标本的检测结果
五、 梅毒螺旋体实验指标的临床应用 对这些实验指标的临床应用中常会出现以下情况: 1)单独用筛查试验(如:RPR试验、TRUST试验等非密螺旋体抗体试验)进行梅毒的诊断。 2)认为筛查试验不好,没有临床应用价值,就在临床实践中丢弃它。 3)只做确诊试验(密螺旋体抗体试验:TPPA,TPHA,TP- ELISA等),阳性一定就是梅毒现症感染。 目前,RPR试验和TRUST试验主要用于梅毒患者的筛查,虽然对梅毒的诊断缺乏特异性,但其在确诊后对治疗的疗效判定有重要意义。只要了解其造成假阳性的原因,结合病历资料分析,就能尽可能的减少假阳性造成的不良后果。常用的梅毒特异性抗体检测方法是传统经典的TPPA,TPHA, TP- ELISA,FTA-ABS方法,只做特异性抗体检测无法确定是否现症感染。对于梅毒的确诊需同时做NtrAT和 TrAT两种检测,并结合临床表现综合判断。筛选试验和确诊试验实验结果解释如下:
现在在梅毒的实验室诊断方面已经比较成熟。我们实验室针对梅毒的实验室诊断运用了三种试验方法(TRUST、TPPA、RPR)。只有根据实验特点、临床需要来选择试验方法,才能充分发挥其优势。为临床诊断提供有力证据。 |
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