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规模化猪场样品采集和送检工作 来自PSY应用研究院 00:00 07:28 点击听语音 — ? ? ? — 主持人：柳毅 嘉宾：郭锐 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 副研究员 01 样品采集前准备工作 ①明确采样目的： 要做疫病监测还是疫病诊断，目的不同采样的方案也会不同。监测以采集正常猪群血样为主、病料为辅，样品数量大；诊断以采集发病猪群病料为主。 ②做好详细的记录： 畜主姓名和地址、品种、性别、年龄、临床症状、眼观病变表现（包括大小和位置）、已经采取的措施（如有）、上次治疗后复发的时间以及该群动物的发病率/死亡率、相关疫苗免疫情况。如果怀疑为人畜共患病，应在送检单中明确标注，提醒实验室检测人员注意。 ③采样物品的准备： 器械：包括采样箱、保温箱、酒精灯、酒精或者碘酒棉球、各规格的一次性兽用注射器和采血管等, 灭菌好的大小解剖取样器械、各种规格的离心管、玻璃瓶子、平皿、载玻片等, 试管架, 无菌棉球, 胶带, 密封袋和冰袋等。 记录用具：包括记号笔、登记表、标签纸等, 务必和器械类分开放置。 样品保护液：病料保存液( 蒸馏水、生理盐水、30%甘油缓冲液等)、固定液( 95%酒精、10%福尔马林溶液) 防护用品：根据需要应包括:口罩、防护眼睛、胶靴、乳胶手套、连体服、防护帽、消毒液和喷壶、肥皂或者洗手液、手盆等。 样品采集操作技术 尿: 排尿时，用一次性消毒塑料杯接取20～30mL。 粪: 用棉拭子从直肠采集。 脓汁、胆汁: 用注射器吸取放入灭菌试管中。 淋巴结、肺、肝、脾、肾等有典型病变部位采集2～3cm2的组织块, 置灭菌容器中。 血液：中大猪在耳静脉采血，仔猪猪在前腔静脉采血。无菌采取10mL血液,分别置于无抗凝剂和有抗凝剂的采血管中。 肠：用线扎紧一段肠道的两端,然后将两端切断, 放入灭菌容器中。 水疱性疾病样品则采取水疱皮、水疱液放入50%甘油缓冲盐水中。 流产胎儿整个装入不透水的容器内。 采样过程注意事项 ①做好人员防护 采样人员必须戴好手套、口罩、帽子，穿好工作服等防护用品后，才能进行采样操作，以减少被感染的机会（布鲁氏菌病、口蹄疫、链球菌等）。 死因不明的动物尸体在解剖前应先对病情、病史加以了解、详细进行检查，如疑为炭疽（急性死亡、天然孔出血），切不可解剖，经取末梢血液检查排除炭疽后，方可解剖检查，并采集病料。 ②选择好最佳采样时机 采集的病料力求新鲜。 能进行活体采集的病料尽量进行活体采集，如采集血液、乳汁、尿液以及鼻拭子等。 患病动物死亡后，随着时间的延长，尸体腐败，组织器官的病理变化会发生一定程度的改变，病原体种类也可能增加，有碍于病原体的检查。 因此内脏病料的采集，须于患病动物死亡后立即进行，一般不超过6h，夏季最好不要超过4h，冬季北方可适当延长至24h。 采集全血液样品时, 被采猪群一般最好先禁食8h。 如果检测病毒, 最好在体温升高, 发病初期采集，对于怀疑带毒而没症状的动物，最好被隔离7d以前采样。 在平时做抗体检测时，应采集两次，第一次是在理论上抗体最先出现的时期采集, 第二次是在理论上抗体快要达到消长的末期时采集。 用作寄生虫检测时，要根据被检测寄生虫的特点，决定相应的时间和采血的部位，制成血涂片等。
③采集有典型性针对性的适量样品 诊断检测时——样本最好发病初期（未用药），临床症状明显期采集5只（头）以上病死和发病动物的有病变的器官组织、血清和抗凝血各10份。 免疫效果监测时-——动物免疫后14-20天，随机采集同群动物血清样品30份。 ④病料采集的全过程要求无菌操作，做到一畜一套器械，防止样品交叉污染。 样品的处理 病理组织学检测样品：要想使试验诊断得出正确结果，除采取适当的病料外，需使病料保持或接近新鲜状态，为此需对病料进行处理。采用10%福尔马林液(10%甲醛溶液)或95%酒精等固定。固定液体积应为病料的10倍。如用10%福尔马林固定组织，经24小时必须更换一次新鲜溶液。神经系统组织需使用10%福尔马林，并且加入5%～10%的碳酸镁。 细菌学检测样品：一般用灭菌的液体石蜡、30%甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液来保存病料。 病毒学检测样品：一般使用50%甘油缓冲盐水，需作组织学检查的材料最好使用包音氏固定液或岑克氏固定液。 血清学检验材料：从发病猪无菌采取血液，注入灭菌试管中，室温或37℃放置0.5～1h（有利血清自然分离），然后4℃冷藏。 样品送检 一般采集样品后必须24小时内送抵实验室，放在4℃左右的容器中运送。 送检病料的容器一般采用保温箱或泡沫盒，内置冰块进行运输。送检越快越好，避免病料接触高温和阳光，以免病料腐败或病原体死亡。送检过程中要防止倾倒、破碎、避免样品泄漏，要注意有的样品不能剧烈震荡，要注意缓冲放置，所有样品都要贴上能标示采样猪的详细标签。 |
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