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一言不合就RNA-seq?芯片有时更合适!

 微笑如酒 2017-06-28

老板给了你几个样本几株细胞,要求你选一些miRNA、lncRNA甚至circRNA出来研究研究,你该怎么办?

于是听说NGS比较火,那就RNA-seq吧,反正也贵不了太多!其实未必,有些时候,Microarry更合适,尤其你不需要检测新基因、对重复性要求较高而且经费又有限的情况下。

高通量测序(NGS)和基因芯片是对转录组中的基因的拷贝数、不同剪切体等定性和定量的两大神器,一直以来被广泛使用,microarray应用的更广泛也更早,但是不足也很明显,其不能对新的转录本进行检出。

(一)高通量测序:数据量大

高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术('Next-generation' sequencing technology),以能一次并行对几十万到几百万条DNA或RNA分子进行序列测定,又被称为深度测序(Deep Sequencing)

高通量测序的原理就不多说了,太复杂,咱们也没必要掌握,样本或者细胞交给外面靠谱的公司:抽提RNA或者DNA→ 建库→上机→rawdata→Bioinformatics挖掘目的分子

RNA-seq相对于microarray的优点不少:

  • 检测物种更广泛:人、大鼠、小鼠等等,芯片有限;

  • 准确性更高,获得的信息更丰富;

  • 更宽的动态范围和更高的灵敏度;

  • 检测选择性剪接位点和新型异构体以及非编码RNA的能力,如siRNA、miRNA、snoRNA和tRNA;

测序的成本近两年降了很多,就拿一个病例样本的RNA-seq来说,现在基本维持在4500~5500之间了,当然如果深度挖掘数据的话,成本也不低的,最好是自己实验室有人懂生信分析,不然钱不会少花的。

(二)基因芯片有时更合适

基因芯片上排列着大量的核酸探针,可以代表生物的整个基因组或部分基因组,比如外显子、miRNA、单核苷酸多态性SNP等等。用芯片分析基因表达需要:抽提RNA→cDNA→荧光标记。

芯片上各点的信号强弱,代表了该探针目的基因的表达量。

尽管RNA-seq有那么多的优点,大家对芯片仍是情有独钟。那是因为,相比较于RNA-seq,芯片技术更加成熟,尤其是样本量比较大的研究。芯片在临床研究中也很吃香,因为它的数据处理又快又简单。芯片能提供高度一致的数据,分析软件也相当成熟。通过分析成百上千的样本,基因和miRNA的表达特征已经被赋予了临床上的诊断价值。

这篇刚发表的文章就很好滴说明了基因芯片的优势。

作者用临床样本为正常肺上皮组织和鳞状细胞癌肺肿瘤。

检测的是蛋白质编码基因和非编码长RNAs(lncRNAs)。

发现RNA-Seq和Microarray对蛋白质编码RNA同样有效,但RNA-Seq数据的随机变异性比Microarray要高。与Microarray数据相比,这减少了表达基因和基因的预测潜力,短和低丰度基因检出率会下降。

lncRNAs的检测在RNA-seq中表现也要比Microarray差。

外显子丰度的研究显示,RNA-seq中的许多外显子和外显子丰度的reads不足,而Microarray平台上的检测更为稳定。

尽管如此,研究人员在这两种平台上都鉴定出207个基因进行选择性剪接。

作者表示从效率产出和成本考虑,microarray的表现显然更好!

当样本量较大的时候,基因芯片显然是更好的选择

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