产品速递|关于SYBR GREEN qPCR MIX的那些事

     SYBR? Green qPCR Mix是2×浓缩的用于实时定量PCR扩增的预混合溶液，含有HotStart Taq  DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、SYBR? Green Ⅰ等扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Roche、Bio-Rad、Eppendorf、Corbett等。

产品特点：

高特异性：热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增或形成引物二聚体；

高灵敏度：可有效检测低拷贝数模板；

通用性好：几乎兼容所有类型的实时荧光定量PCR仪；

可重复性好、使用方便：即用型2× Mix，减少加样错误和反应体系配制时间。

应用举例：

一

以乙肝病毒标准血清为模板，扩增目的条带大小为210 bp的片段 ，扩增条件为：holding stage, 95℃, 3 min; cycling stage, 95℃, 15 s，60℃, 20 s，72℃, 20 s, 40 cycles。结果如下：

扩增曲线

熔解曲线

上图的扩增曲线和熔解曲线是使用东盛SYBR? Green qPCR Mix在STRATAGENE MX3005P上进行的Real-Time PCR扩增。

二

以等倍稀释的质粒为模板进行real-time PCR，结果如下：

东盛SYBR? Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒扩增曲线

东盛SYBR? Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒熔解曲线

样品分别是十倍梯度稀释的10 ng/μl - 0.1 pg/μl的质粒。实验仪器：BIO-RAD CFX96

三

与其他公司的同类产品进行比较，结果如下：

东盛与A公司的SYBR? Green qPCR Mix产品的扩增曲线比较

东盛与A公司的SYBR? Green qPCR Mix产品的熔解曲线比较

样品分别是十倍梯度稀释的10 ng/μl - 0.1 pg/μl的质粒。实验仪器：BIO-RAD CFX96

  由以上实验结果可以看出，东盛生物的SYBR? Green qPCR Mix对于不同类型、不同拷贝水平的模板均有非常高的灵敏度、扩增效率，以及特异性。

     SYBR? Green qPCR Mix中的HotStart Taq DNA聚合酶是一种化学修饰的重组Taq DNA聚合酶，该酶在室温下没有活性，可避免引物二聚体的形成和非特异性延伸，从而提高DNA扩增的特异性。95℃孵育3分钟即可恢复酶活性。

     同时，采用了基于核酸适配子（aptamer）的抑制剂，这种抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合，当温度低于45℃时与聚合酶结合抑制酶活性，同样可以减少引物二聚体和其他次级产物对反应的干扰。

     采用这种双重热启动Taq DNA聚合酶进行PCR扩增，能够获得更高的扩增效率和特异性。

东盛生物另有新品Power Green qPCR Mix（P2101/P2102）可供选择。