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杜仲是珍贵的药材，杜仲皮经过十几年的生长才能药用，具有多种生物活性。研究表明，杜仲叶与杜仲皮具有相同的生理作用，且杜仲叶相对皮来说资源更加丰富。研究表明，杜仲叶中含有多种化学成分，主要包括黄酮类化合物和多糖，具有降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、提高免疫力，清除自由基抗衰老等药理作用[1]，已经广泛应用于饲料、食品、医药等领域。杜仲叶用作鸡饲料添加剂，能够改善鸡肉品质、提高免疫力、鸡蛋品质、提高生产性能，作为绿色鸡饲料添加剂应用前景诱人。 1杜仲叶活性成分 1.1黄酮类化合物 杜仲叶中的黄酮类化合物是研究最早的一类物质，目前有关其生物活性的研究已经比较完善，是杜仲叶饲用价值的主要体现者之一。杜仲叶中的黄酮类化合物可以经过提取、纯化直接作为饲料添加剂应用，目前常用的提取方法有超声波提取、微波提取、超临界二氧化碳等多种方法，采收时节和提取方法对提取率也有一定的影响。 徐先猛[2]利用超声法对杜仲叶中总黄酮的提取工艺进行研究，采用正交试验优化了最佳提取工艺，杜仲叶黄酮在最佳工艺条件下得率为2.04%。溶剂浸提法耗时、溶剂用量多，超临界二氧化碳提取技术虽然环保高效，但是试验设备要求较高，微波提取目前还处于实验室研究阶段，工业化应用还需继续中试及扩大化试验。超声波技术已经应用到了多个行业，其成熟的技术和较好的提取效果相信在杜仲叶黄酮的工业化生产中能够发挥更大的作用。大孔树脂分离杜仲叶黄酮纯度较高，是天然产物分离的常用方法。张玲[3]等对杜仲叶黄酮的大孔树脂分离工艺进行研究，并采用高效液相色谱对纯化产物进行检测，从9种大孔树脂中筛选出NKA-Ⅱ为最优树脂，最佳的吸附解吸条件为：上柱液pH为4，流速1.0mL/min，50%～70%乙醇洗脱杜仲叶中黄酮类物质。杜仲叶粗提物依次经过NKA-Ⅱ大孔树脂、聚酰胺树脂和SephadexLH-20树脂的分离纯化，最终得到3种组分，经高效液相色谱检测分析，可能为金丝桃苷或陆地锦苷、槲皮素-乙酰糖苷和槲皮素。 杜仲叶黄酮苷能显著延长小鼠负重游泳时间，降低血乳酸和血清尿素氮含量，提高肝糖原的含量，降低丙二醛的含量，提高T-SOD的活性，说明杜仲叶黄酮苷的抗疲劳作用与增加能量储备、减少过度运动后不良代谢物的生成、提高组织的耐受力以及清除运动中产生的大量自由基等作用有关[4]。除此之外，杜仲叶黄酮还是一种有效的天然抗氧化剂，杜仲叶黄酮对红细胞溶血和脂质过氧化有明显的抑制作用，且随黄酮添加量的增大而增大，作为饲料抗氧化剂应用安全放心[5]。 杜仲叶黄酮饲养的营养性高脂小鼠的血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、动脉粥样硬化指数(AI)均有不同程度的降低，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)有所上升，血中过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性增强，血浆中丙二醛(MDA)的含量下降，杜仲叶黄酮具有降低营养性高脂血症小鼠血脂和抗氧化的作用[6]。 1.2多糖 杜仲叶中多糖含量与黄酮类化合物相差不大，目前的研究热点集中在提取、分离及生物活性方面，对此进行深入研究，才能明确杜仲叶多糖的作用机理，为其应用做好铺垫。杜仲叶作为饲料添加剂具有多种饲用效果，但是具体是何种成分或者是多种成分协同作用并不清楚，此方面的研究还需深入。 目前，杜仲叶多糖提取方面的研究较少，主要是因为大多数研究者将研究目标对准了杜仲皮而忽略了更有研究意义的杜仲叶，杜仲叶资源丰富，深入研究可以代替杜仲皮在某些领域得到更好的应用。用水作为多糖的提取剂不仅节省资源而且还能保证多糖的安全使用性能，刘军海等[7]针对杜仲叶多糖的提取，在单因素试验的基础上根据Box-Benhnken的中心组合试验设计原理设计试验并优化杜仲叶多糖的提取条件，结果表明，杜仲叶多糖水浸提的最佳工艺条件为：提取温度84℃，浸提时间1.3h，料水比1∶14.3。浸提一次，杜仲叶多糖的提取率达到1.7756%。 植物多糖的提取物大多含有酚类化合物，在提取过程中容易氧化生成其他色素，这类色素大多呈负性离子，其存在会影响多糖的色谱分析和性质测定，因此脱色及分离纯化非常重要。大孔树脂和活性炭的脱色效果较好，脱色率均在90%以上，双氧水脱色，杜仲叶多糖氧化分解严重[8]。杜仲叶活性多糖经硫酸-咔唑反应及气相色谱法测定，单糖组成为：L-鼠李糖，D-岩藻糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡糖糖、D-半乳糖、糖醛酸，其中D-阿拉伯糖含量最高[9]。 采用矩形波形式的电刺激，观察不同浓度的杜仲叶多糖对蟾蜍肌肉抗疲劳性能的影响。与对照组相比，多糖溶液组明显缩短肌肉达到最大收缩幅度的时间，并延缓肌肉疲劳的发生，杜仲叶多糖具有改善蟾蜍肌肉运动性能的作用[10]。用水提法提取的杜仲叶多糖对小鼠进行饲喂试验，检测不同剂量时杜仲多糖对小鼠免疫功能的影响。结果显示，杜仲多糖高剂量时可以非常显著的提高小鼠脾脏指数；中、高剂量可以显著提高血清中白细胞介素和免疫球蛋白的含量，因此证明杜仲叶多糖可以有效提高小鼠的免疫功能[11]。 2杜仲叶在鸡饲养中的应用 2.1提高肉鸡的抗氧化能力 随着合成抗氧化剂在国际上被许多国家禁用，研发天然中草药抗氧化剂已日益受到国内外研究人员的重视。杜仲叶主要通过活性成分的清除自由基作用来达到抗氧化功效，从而提高肉鸡的各项生产性能。观察杜仲叶水煎液对肉杂鸡抗氧化功能的影响，选用1日龄肉杂鸡272只，随机分成4组：对照组饮用自来水，低、中、高给药组饮用含杜仲叶水煎液的水(含生药量分别为5g/L、10g/L、15g/L)，喂养6周。于2、4、6周末从各组随机抽样8只肉杂鸡心脏采血，测定清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量。杜仲叶各剂量组血清中的SOD，GSH-Px，CAT的活力均显著高于对照组；而血清中MDA的含量显著低于对照组。杜仲叶水煎液能提高肉杂鸡的抗氧化功能，并且存在一定程度的正向量效关系[12]。 MDA是活性氧自由基对生物细胞膜上不饱和脂肪酸氧化的产物，MDA生成增加干扰双层磷脂排列的生物细胞膜上镶嵌的多种酶的空间结构，引起双层脂质的脂类、蛋白质发生交联、聚合形成脂褐质，从而使细胞膜产生广泛性损伤及病变，影响细胞膜的正常功能。所以用MDA的含量反映机体内自由基生成的情况，SOD、GSH-Px和CAT的活性反映机体内自由基清除的情况。随着复方杜仲的剂量增加，SOD、GSH-Px、CAT的活性升高，MDA的含量在一定程度上有所下降，说明复方杜仲在维护机体内自由基的代谢方面起着重要的作用，能够有效清除机体内的自由基，降低MDA的含量，提高机体的抗氧化功能。同时也表明抗氧化酶之间存在明显的协同作用，从而说明了本中药方剂配伍的科学性、有效性[13]。 2.2改善鸡肉品质 杜仲叶粉能显著提高鸡的饲料报酬(降低料重比)、改善其胴体品质和血液生化指标，进而改善其肉用性能；杜仲叶粉可作为改善鸡肉用性能的纯天然、植物性饲料添加剂在养鸡业中使用，其最佳添加量为1.0%～1.5%[14]。用杜仲叶作为饲料添加剂喂养鸡可增加鸡皮中胶原蛋白的含量[15]。 杜仲叶的抗氧化作用可以使肉色变亮，品质提高[16]。在雪峰乌骨鸡的基础日粮中添加不同比例的杜仲叶粉，并以不添加杜仲叶粉作为对照，经90d饲养试验期，测定杜仲叶对鸡肉品质的影响。杜仲叶粉能显著提高饲料报酬(降低料重比)、胸腿肌占全净膛的比率、血清高密度脂蛋白及血清总蛋白含量；显著降低腹脂肪占全净膛的比率、血清甘油三酯及低密度脂蛋白含量[17]。 日粮中添加杜仲提取物能显著提高三黄鸡平均日增重、提高饲料转化率，改善三黄鸡胴体品质及肌肉品质，且能显著提高胸肌率。添加杜仲提取物能显著提高艾维茵肉仔鸡成活率，改善胴体品质，且添加2,500g/t杜仲提取物对提高胸腿肌率有一定促进作用。血液生化结果表明：杜仲提取物能提高肝脏合成蛋白质的能力，加强脂类代谢和提高机体免疫力，从而在一定程度上促进肉仔鸡的生长[18]。杜仲叶添加到饲料中还有一定的防霉效果，是多功能的饲料添加剂。 2.3提高肉鸡免疫力 杜仲加入到动物日粮中可以通过多条途径发挥免疫作用，是促进免疫器官的发育最有效的途径之一。添加2.5%、5%杜仲提取物试验组中胸腺小叶、脾小结和法氏囊小结发育程度与对照组相比均发生显著性变化，因而从组织学角度进一步表明了杜仲能够不同程度地促进免疫器官的发育，增强机体的免疫应答能力，从而提高机体的抵抗力[19]。 日粮中添加杜仲提取物能显著提高三黄鸡平均日增重，提高饲料转化率，降低盲肠中大肠杆菌的数量，且有利于盲、回肠中乳酸杆菌和双歧杆菌的增殖。根据试验结果，肉鸡日粮中杜仲提取物的适宜添加量为2,000～2,500g/t[20]。为研究杜仲多糖(EOP)对家禽免疫应答的影响，将120只1日龄三黄鸡随机分成4组，分别接种含有不同剂量的EOP的新城疫和禽流感疫苗，检测相关免疫指标的变化。结果显示，添加８mg/mLEOP能显著提高三黄鸡新城疫和禽流感抗体水平、T淋巴细胞含量和白细胞吞噬指数，EOP对疫苗免疫具有佐剂作用，且EOP的添加量与其佐剂效果有一定的相关性[21]。 杜仲可以通过防治疾病来体现它的免疫功能，为研究杜仲对蛋鸡脂肪肝综合征的防治作用，选用35周龄AA肉鸡320只，人工复制病理模型鸡，随机分成4组，对照组饮用自来水，低、中、高给药组饮用杜仲叶水煎液(含生药量分别为10g/L、15g/L、20g/L)，试验期6周。于4、6周末从各组随机抽样8只鸡心脏采血，测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝脏脂肪含量及肝重/体重。观察剖检变化。结果显示，杜仲各剂量组血清中的TC、TG、肝脏脂肪含量及肝重/体重均显著低于对照组；而剖检时肝脏的变化不大。杜仲能够防治产蛋鸡脂肪肝综合征，添加剂量和预防效果成正相关[22]。 3结语 近年来随着激素类饲料添加剂的滥用，导致禽畜的免疫力及肉质下降，出现不同程度的食用安全问题。天然植物提取物作为饲料添加剂为养殖业及消费者带来了新的希望，使用安全无毒，在提高禽畜各项性能的同时还能降低饲养成本及料重比，是比较经济的饲料添加剂。杜仲叶作为饲料添加剂资源丰富，具有和杜仲皮相同的生理功效，饲用价值丰富，可以作为饲料抗氧化剂、防霉剂使用，还能提高禽畜的生产力和免疫抵抗力，改善肉质。开发杜仲叶饲料添加剂不仅可以降低激素类饲料添加剂的副作用，还可提高饲养者的经济效益，是一个两全其美的方法，应该大力推广。 （陕西理工学院化学与环境科学学院，唐瑶,陈洋,李普庆）
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