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深部真菌病(invasive fungal infection,IFI) 是指真菌侵犯各脏器、粘膜、皮下组织和皮肤（除表皮外）引起的感染，其中以念珠菌属为主要致病菌（占80%以上），白念珠菌最为多见。其他常见的致病菌还包括隐球菌、曲霉、接合菌（主要指毛霉菌）、孢子丝菌、马内菲蓝状菌、组织胞浆菌等。IFI主要发生在免疫缺陷和免疫抑制的患者，多见于风湿免疫病、血液病、肿瘤、糖尿病、器官移植和造血干细胞移植的患者。 目前IFI确诊主要依据临床表现和无菌体液或经纤维支气管镜防污染毛刷取得的标本培养分离出真菌。鉴于微生物培养周转时间长，也可辅助于一些快速试验如真菌1,3-β-D-葡聚糖检测（G试验，适合丝状真菌和酵母样真菌感染）和曲霉半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验，适合丝状真菌感染）。 近年来，由于恶性肿瘤、免疫缺陷、移植患者数目的增多以及长期应用激素、免疫抑制剂和广谱抗生素等，深部真菌病发生率呈上升趋势，是临床微生物关注的热点之一，以下跟大家分享一例血培养分离培养出马内菲蓝状菌的病例。 涂片革兰染色镜下可见真菌孢子和菌丝（图1），不像酵母菌藕节状的假菌丝，没有侧分生孢子。 37℃培养24h后BP、SDA上的菌落形态（图2），MAC和CA上无菌生长。 挑取菌落革兰染色（图3），可见椭圆形、长形酵母样菌体，真菌丝？ 挑取菌落上质谱，低得分不可信结果且没有一个是真菌的结果（图4）。板放回37℃培养箱。 1、血瓶涂片镜下看到孢子和菌丝，孢子少，不是藕节状菌丝； 2、37℃培养24h SDA上菌落小而少，菌落形态不是典型酵母样菌落； 3、质谱做不出来。 推测：念珠菌以外的酵母菌？丝状真菌？双相丝状真菌？ 1、查病例，患者男，58岁，因“咳嗽、咳痰伴气促10天，发热5天”入院。既往有“寻常型天疱疮”病史1年余，长期口服“美卓乐、环磷酰胺”治疗。胸部CT平扫提示双肺弥漫性间质性炎症伴肺间质纤维化，肺内结节及空洞性病灶。反复查血常规中性粒细胞大于90%。G试验48.71pg/ml，GM0.288。 长期使用激素和免疫抑制剂，符合深部真菌感染的易感因素。 2、再从血瓶抽取培养物转种SDA，放置室温培养。 室温24h（图5） 室温48h（图5），产酒红色色素。 37℃培养48h（图6），酵母样菌落。 室温72h（图7），菌落表面呈绒毛样且产酒红色色素。 37℃培养72h（图8），酵母样菌落。 1、 双相真菌，产酒红色素 2、 因咳嗽咳痰10天、发热5天入院，胸部CT提示肺部感染，肺部首先受累。中性粒细胞>90%。 推测：马内菲蓝状菌 用透明胶带粘取菌落贴于玻片上（棉兰染色），直接镜检。可见马内菲镜下特点：分隔菌丝、分生孢子梗无顶囊，帚状枝双轮生（图10）。 马内菲蓝状菌是一种条件致病性真菌，是青霉菌中唯一一种双相真菌。该菌自然宿主是竹鼠以及竹鼠生活的洞穴周围的土壤，主要分布于东南亚及我国香港、广西和广东地区。马内菲感染主要认为是通过吸入已存在于空气中的孢子所致，肺部通常最早受累，也通过淋巴、血行广泛播散，多有脓毒血症症状，侵犯多器官，全身多处脓疡。 菌落特征：25℃培养为青霉相，在沙氏琼脂（SDA）上约2-3天开始生长，菌落最初呈淡黄色绒毛状，中央气生菌丝呈绒毛状向周围扩展，逐渐形成淡灰褐色带淡红色绒毛状，背面产葡萄酒色素扩散到整个培养基；37℃培养为酵母相，菌落生长缓慢，呈酵母样型，膜状，有脑回样被褶，奶酪色，湿润。 显微镜特征：25℃青霉相可见无色透明分隔菌丝，分生孢子梗光滑无顶囊，帚状枝双轮生，2-6个瓶梗，顶端狭窄，可见单瓶梗，其顶囊有单链分生孢子，散乱。37℃酵母相可见圆形、椭圆形、长形酵母样菌体，可见关节孢子。 培养96h，青霉相（图9，左）产酒红色色素，色素扩散整个平板；酵母相（右）不产色素。
培养第五天青霉相菌落
1、 流行病学近年来真菌感染率不断上升，菌群也发生了明显的变化。多关注学习念珠菌以外的酵母菌和丝状真菌。 2、 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOP-MS）技术是一种简单、快捷、准确的微生物鉴定新技术，但也存在一些瓶颈问题，对一些细胞壁难以破坏的微生物的鉴定能力还不够高。依靠而不依赖新技术，工作中巧妙应用经典方法与新型方法，才能为临床提供及时准确的检验结果。 3、 该病例G试验和GM试验都没有明显升高。这些检测方法存在干扰因素较多，因此对于每一个检测结果，密切联系临床实际，加强检验与临床的沟通，对于合理分析结果尤其重要。 再次提醒各位医生血培养的重要性，附几张PPT
有任何疑问，欢迎致电2492 血培养高质量的送检，有您的一份功劳！ |
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