Invent MinuteTM 动物总蛋白提取实验操作 没有Wifi的小伙伴们也不要着急,贴心的为小伙伴们准备了下方的图文版! 1.将样品放入离心管柱套管中(植物样品同样操作) PS:细胞样品贴壁细胞可直接在培养容器中操作,悬浮细胞可收集后放入离心管 2.用研磨棒将组织进行研磨(植物样品同样操作,细胞样品跳过此步骤) 3.按照说明书加入与样品量成比例的裂解液(细胞样品请计数或按细胞体积添加) 继续研磨几次可见样品变得十分粘稠(此为DNA双链完全打开的正常现象,样品越粘稠说明裂解效率越高),与DNA紧密结合的蛋白也可全部获取,无蛋白丢失) 细胞样品跳过此步骤 4.将离心管柱放入离心机中14000rpm,离心30秒 5.取出离心管,将离心管柱弃掉,蛋白样品制备完成!可直接用BCA法检测浓度及下游各项应用。 蛋白提取就这么分分钟结束了!蛋白提取就这么分分钟结束了!蛋白提取就这么分分钟结束了!重要的事情说三遍! 效果如何呢? 请看肉眼可见的结果 用BCA法检测浓度,为了更直观的让大家观看结果,孵育5分钟后的颜色变化,此时0.5mg/ml和0.25mg/ml的标准品基本还没有显色,而我们的样品稀释16倍后的颜色已经超过1mg/ml。(PS:浓度这么高,下次小伙伴们是不是就可以少做点细胞培养,少买培养基,血清,各种器皿....吧啦吧啦,你懂得!) 肉眼可见的结果,你还在等什么呢?无需匀浆,无需超高速离心,无蛋白丢失快来体验柱式法带来的新乐趣吧! |
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来自: 申栋帅 > 《Western Blotting》