聚丙烯酰氨凝胶电泳配方与步骤（精华）储备液：丙烯酰胺浓缩液（30%T、2.7%C）:将29.2g丙烯酰胺与0.8g双丙烯酰胺溶解于70
ml去离子水中。当丙烯酰胺完全溶解后，定容至100ml。采用0.5微米滤膜将溶液进行真空抽滤。4℃保存于棕色瓶中。保存时间不能超
过1个月。1.5mol/LTris-HCl，pH8.8，浓缩的分离胶缓冲液：将18.2gTris-base溶解于约80
ml水中，HCl调节pH至8.8，加水定容至100ml。4℃保存。0.5mol/LTris-HCl，pH6.8，浓缩的积层
胶缓冲液：将6.1gTris-base溶解于约80ml水中，HCl调节pH至6.8，加水定容至100ml。4℃保存。10%
（m/V）SDS：将10gSDS溶解于100ml水中。样品储备缓冲液[0.06mol/LTris-HCl，pH6.8，
2%SDS，10%甘油，0.025%溴酚蓝]:水4.8ml0.5mol/LTris-HCl，pH6.81.2ml1
0%SDS2.0ml甘油1.0ml溴酚蓝痕量室温下保存。SDS-还原缓冲液通过在使用样品储备液前，每0.95ml储备液
中加入50微升2-巯基乙醇而制备。催化剂10%过硫酸铵，现配现用。TEMED:使用瓶中未经稀释的TEMED。阴凉干燥避光保存。电
泳缓冲液每100ml中加入0.3gTris碱，1.4g甘氨酸，1ml10%SDS。凝胶制备分离胶配方组分7.5%T1
2%T水4.85mL3.35mL分离胶储备液2.5mL2.5mL10%SDS0.1mL0.1mL丙烯酰胺/双丙烯酰胺
（30%T）2.5mL4.0mL10%APS50μL50μLTEMED5μL5μL积层胶（10mL）：水6.1
ml0.5mol/LTris-HCl，pH6.82.5ml10%SDS0.1ml丙烯酰胺储备液1.3ml电泳：常
规电泳采用恒流模式：16-24mA/mm凝胶厚度迷你电泳设备采用恒压模式：20-30V/cm凝胶长度通常电泳持续到溴酚蓝到达凝
胶底部。染色与脱色：染色液:将0.1%考马斯亮蓝R-250（m/V）溶解于40%甲醇（v/v）、10%乙酸中（v/v）。溶解后过
滤。染色液可以重复使用，室温保存。使用过量的染色液浸泡凝胶，时间为30分钟。使用大量过量的40%甲醇，10%乙酸进行脱色。染色前，
将胶放置在40%甲醇（v/v）、10%三氯乙酸中（m/v）中孵育1小时，可以防止小分子量蛋白在脱色过程中的损失。 |
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