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网上看到的资料。有图片不太会编辑，看原文可以百度搜索“猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展” 4.2 全病毒灭活疫苗 4.2 .1生产工艺 由于原核表达与真核表达成本高，而且表达产量有限，对于蛋白纯化要求较高，制约了产品的市场推广。所以更多的是采用全病毒灭活的方式研究疫苗，梅里亚是最早投放市场的全病毒灭活疫苗，但梅里亚圆环疫苗没有在中国注册。关于全病毒灭活疫苗最大的瓶颈在于如何获得高滴度病毒液，所以必须优化工艺，提高滴度，目前，生物制品厂家多采用微载体悬浮培养的方式来获得高滴度病毒（通过悬浮培养GMP验证的车间很少），这就能克服圆环病毒毒力弱带来活力不强的难题。 4.2 .2 毒株 目前市场上主要还是全病毒灭活疫苗，主要毒株：SH株、LG株、DBN-SX07株、WH株、ZJ/c株之分，但从本质上讲，是没有区别的，因为圆环病毒具有致病性的只有圆环2型，而且只有1个血清型，这5个毒株均属于PCV-2b，毒株只能表明分离地点以及天然免疫原性而已，笔者在NCBI上下载了PCV-1、PCV-2a、PCV-2b等参考序列，运用MEGA 4．0进行与疫苗毒株ZJ/C株、WH株、LG株、SH株、DBN-SX07株等序列进行比对，我们清晰的发现：ZJ/C株、WH株处于同一分支；LG株、SH株处于同一分支；DBN-SX07株与LG株、SH株遗传距离更近，这个也与毒株分离早晚有一定关系，LG株、SH株疫苗2011年上市、DBN-SX07株疫苗2012年上市、ZJ/C株、WH株2013年上市，但这5个毒株均处于1个大分支，这也说明他们之间的遗传距离比较近，所以，对于圆环病毒这个产品来讲，依据毒株选择疫苗没有多少实际意义，市场宣传毒株只是炒作的噱头而已，关键还是要病毒含量的高度。 .2 .3 病毒含量 关于病毒含量，养殖场（户）老板以及技术人员一般对于此项技术参数理解较差，因为病毒含量的表示通常比较抽象，但此项技术指标也是最重要的参数，因此，这里提示各位养殖同仁注意。疫苗的免疫效果与病毒含量成正比，提高疫苗效果最好的方式之一就是增加抗原滴度。目前市场上的疫苗上市时间早晚不一，毒株各异，病毒含量差别也比较大，早期上市的产品病毒含量比较低，但最近上市的无论ZJ/c还是WH株，病毒含量都达到107.0TCID50以上，病毒含量最高的产品甚至是最低产品的63倍。对比各个毒株：病毒含量ZJ/c株＞WH株＞SH株＞LG株=DBN-SX07株。用另一种直观表示方式：ZJ/c株1头份=2头份WH株=20头份SH株=63头份LG株/DBN-SX07株。 4.2 .4 佐剂 目前猪圆环病毒疫苗所用佐剂主要有水包油（O/W）、油包水（W/O）、水包油包水(W/O/W)3种剂型，水包油（O/W）佐剂：又称为水质佐剂，和水的吸收性差不多，特点是比较稀。油包水（W/O）：又称为油类佐剂，特点缓释作用比较强。水包油包水(W/O/W)：又称为双相佐剂，特点介于水包油（O/W）、油包水（W/O）之间。 但目前生物制品厂家基本都宣传自家的好，由于圆环病毒毒力较弱，免疫原性较差，而且病毒很难获得高滴度培养，所以在佐剂的选择就显得非常重要，无论是哪种佐剂，都具备增大抗原颗粒，提高免疫原性，缓释作用，持续刺激，延长保护期的作用。所以佐剂的选择也必须考虑到吸收性与缓释性的平衡，所以这个只是厂家宣传显示与众不同的着眼点而已。作为养殖户选择疫苗注意观察两个指标：通针性与保护期，这个两个指标就是针对佐剂吸收好、缓释强的最好诠释。 4.2 .5灭活剂 猪圆环病毒是公认的免疫抑制的重要病原，尽管毒力相对较弱，但风险很高，目前基本都是灭活疫苗。灭活疫苗就牵扯到灭活剂的问题，使用灭活剂就要考虑有无残留的问题，如果存在残留，就会出现易致癌性、过敏反应几率高、疫苗反应重等缺点。 目前的灭活剂主要有：甲醛、BEI(二乙烯亚胺)、BPL（β-丙酰内酯）三种，甲醛最大优势价格便宜，灭活彻底，缺点是易造成残留，而且灭活会损伤病毒的糖蛋白，造成免疫原性下降，BEI和BPL，不易残留，不损伤糖蛋白，不影响免疫原性，但存在不易保存、价格昂贵的缺点。目前，灭活剂的发展趋势就是使用无残留的方法发展，国外大部分产品基本转上BEI、BPL灭活剂。但综合这几种灭活剂，BPL是灭活时间最短的（2个小时就可以彻底灭活），灭活最彻底得，不易残留（37℃，2个小时彻底水解），目前，也是最炙手可热的灭活剂 4.1.2 .6首免日龄 目前首免日龄主要有2周龄、3周龄、4周龄，还有免疫母猪等首免方式，由于圆环病毒最大的危害主要表现在保育猪上，也就是说需要早免疫，对于圆环的防控有很大的帮助，所以有很多企业，说明写着3周，却建议2周龄免的这种现象的出现，就是出于这个原因。 4.2 .6首免日龄与免疫次数 目前首免日龄主要有2周龄、3周龄、4周龄，还有免疫母猪等首免方式，由于圆环病毒最大的危害主要表现在保育猪上，也就是说早免疫，对于圆环的防控有很大的帮助。首免日龄越早，但猪日龄越小，免疫器官免疫功能低下，效果就越差，同时，由于猪日龄小，对外源病原的刺激就越敏感，造成过敏反应、疫苗应激就大很多。因此，疫苗免疫日龄对疫苗质量有着更高的要求。高质量疫苗本身必须具备三个条件：病毒含量高、疫苗纯度高、疫苗粘度小。但由于目前圆环病毒疫苗供大于求，由于竞争的关系，为了更突出自己的产品优势，有一些企业，疫苗说明写3周，却建议2周龄免的这种现象的出现，就是出于这个原因。总之，圆环疫苗的首免日龄早与疫苗质量呈正相关。 对于同一个产品，通常免疫次数越多，免疫效果就越好，1次免疫之后，抗体水平会逐渐上升，到达高峰之后，抗体滴度会随着时间的延长而下降，但当抗体滴度处于保护临界值附近，需要进行2次强化免疫，由于第1次免疫之后，会产生大量的Tm细胞（记忆性T细胞），能诱导产生大量的圆环病毒抗体的细胞克隆，通过第2次强化免疫，会激活Tm细胞功能，诱导大量的圆环病毒抗体的细胞克隆产生圆环病毒抗体，从而引起抗体水平比首免有更高的抗体高度。但免疫次数多，养殖场的劳动强度就大，成本就高，免疫1次成为了生物制品厂家与养殖场的追求。但如果免疫1次，那疫苗必须具备2个条件：高抗原含量、高缓释能力；这样就能够把保护性抗体持续到4月以上，育肥猪通常养殖周期在5个半月至6个月，而猪圆环病毒主要危害保育猪（一般为1月龄-2个月龄），正好在发病高峰期，圆环病毒的抗体水平处于高峰，所以会对猪圆环病毒有很好的保护作用。 目前市场上，免疫1次：勃林格、富道、ZJ/c株、WH株；免疫2次：英特威/先灵葆雅、梅里亚、LG株、SH株、DNB-SX07株。但由于圆环疫苗价格较贵、加上圆环病毒单纯发生的较少，也就是说免疫效果难以用肉眼评估，一些本来需要免疫两次的产品（主要病毒含量低）在宣传上忽悠养殖户免疫1次，主要目的让养殖场免疫1次，成本低，接受程度更容易，但是由于产品抗原含量低，抗体水平不高，维持时间较短，造成使用效果不明显，这个也是为什么有些猪场反映免疫猪圆环病毒疫苗没有效果的根本原因。当然，免疫1次，这个是圆环疫苗的发展方向，随着生产技术的发展，这个很快就会成为现实，我们欣喜的看到近期上市的国产猪圆环病毒疫苗ZJ/c株、WH株都是免疫1次（病毒含量107.0TCID50以上）。所以，疫苗的免疫次数与病毒含量有很大关系，选择疫苗一定要学会看病毒含量。 4.2 .7免疫保护期与产生保护时间 由于圆环病毒颗粒较小、毒力较弱、免疫到产生完全保护的时间较长、免疫保护持续期较短，目前上市的产品免疫保护持续期为3-4个月，免疫后产生免疫保护的时间为21-35天。虽然，现在上市的毒株很多，但结果有较大差异，主要还是因为各个厂家的病毒含量有差异造成的，我们看到病毒含量高的产品，不但免疫次数少（免疫1次），而且免疫保护期反而长（达到4个月），从这个角度也说明了，提高圆环病毒疫苗的病毒含量的重要性       |
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