从测序到临床全方位解读lncRNA在乳腺癌中的机制——文献精读

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。随着生活环境的影响和广大人民群众生活方式的改变，乳腺癌在全球范围内的发病率逐年增高，已经成为一种常见的恶性肿瘤，对于女性健康造成了严重的威胁。乳腺癌的研究一直是科研领域的热点。近年来，随着对非编码RNA研究深入，科研工作者不断发现LncRNA在乳腺癌的肿瘤进程中发挥越来越重要的作用。

作者通过Sample Set Enrichment Analysis RNA-Seq测序分析筛选出乳腺癌与良性癌旁组织中具有差异表达的LncRNA，共437个。作者根据乳腺癌不同分型，继续筛选在雌激素受体ER阳性与ER阴性乳腺癌中差异表达LncRNA，确定了研究目标—DSCAM-AS1，含有雌激素受体结合位点，可能受雌激素调控。

既往研究发现，DSCAM-AS1可能参与luminal乳腺癌细胞系增殖。作者通过研究发现DSCAM-AS1在多种雌激素受体阳性细胞系中高表达。在MCF7以及T47D细胞系中，通过ChIP-seq研究发现在雌激素诱导下ER可以结合在DSCAM-AS1启动子区域，引起DSCAM-AS1表达升高。当给予他莫昔芬后，可以与雌激素竞争性结合雌激素受体ER，逆转DSCAM-AS1高表达现象，提示DSCAM-AS1受雌激素调控。

作者通过数据库分析发现，DSCAM-AS1与肿瘤进展、他莫昔芬耐药、乳腺癌分级、转移等显著正相关，与乳腺癌预后良好相关基因呈负相关。

作者为了研究DSCAM-AS1在雌激素受体阳性乳腺癌细胞系中角色，选择MCF7以及T47D两种雌激素受体阳性细胞,构建了DSCAM-AS1稳定敲减细胞系。

DSCAM-AS1稳定敲减细胞系中，细胞增殖能力降低，侵袭能力减弱，克隆形成细胞数目减少。

为了进一步研究DSCAM-AS1与肿瘤进展关系，作者选择表达DSCAM-AS1能力中等的两株雌激素受体阳性细胞系T47D与ZR75-1，进行DSCAM-AS1稳定过表达，研究发现细胞侵袭能力增强。

体外裸鼠成瘤实验证明，敲减DSCAM-AS1后，肿瘤肝转移能力降低。

LncRNAs一般 通过结合RNAs, DNA或者蛋白质发挥功能，寻找LncRNAs结合的蛋白质是研究LncRNAs作用机制的关键步骤。

作者通过pull-down技术，筛选出与DSCAM-AS1结合的蛋白质-hnRNPL，并通过RIP技术进行了进一步的确认，证实了DSCAM-AS1与hnRNPL的特异性结合。

为了研究DSCAM-AS1与hnRNPL的作用机制，作者进行了功能挽救实验：过表达DSCAM-AS1，同时敲减hnRNPL，研究发现敲减hnRNPL可以逆转细胞侵袭能力增强的现象。

作者进而探究DSCAM-AS1与hnRNPL是否存在结合位点，首先是DSCAM-AS1序列上发现了hnRNPL特异结合的CACA富集区；进而通过构建DSCAM-AS1不同区域突变亚型，通过RNA pull-down实验确认DSCAM-AS1与hnRNPL的结合位点位于DSCAM-AS1CACA富集区。

在临床上，ER阳性乳腺癌可能逐渐发展为激素治疗抵抗。由于DSCAM-AS1参与ER阳性乳腺癌进程，作者进一步研究DSCAM-AS1在雌激素抵抗治疗中参与发挥的作用。首先在他莫昔芬耐药MCF7细胞中，DSCAM-AS1表达显著上调。敲减DSCAM-AS1后，细胞对他莫昔芬耐药性减弱。

通过以上研究，作者筛选到ER调控的LncRNA，进而寻找到LncRNA结合的蛋白质hnRNPL，验证了LncRNA DSCAM-AS1在ER阳性乳腺癌进程以及激素抵抗过程中参与发挥的作用。

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