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杂交瘤细胞测序的意义及应用

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相关服务:杂交瘤细胞测序

在杂交瘤细胞制备的过程中,经过单克隆筛选后,杂交瘤细胞应尽快冻存,但杂交瘤细胞在冻存过程中有丢失高特异性高活性的风险,或者细胞状态不好乃至死亡。为了解决这个问题,可以对筛选得到的杂交瘤细胞进行测序。

 
 

杂交瘤测序意义:经过杂交瘤测序,可以获得相应的序列,在以后项目中有需要用到单克隆抗体的时候,可以利用测得的基因序列进行重组抗体的制备。解决了杂交瘤保存过程中,细胞死亡或高特异性丢失的问题。杂交瘤测序,对于进一步的大规模生产及抗体的人源化等生物工程操作同样具有重要的意义。

杂交瘤测序的常规流程:

杂交瘤细胞RNA抽提

● 5’RACE反转录

● cDNAPCR获得抗体重链/轻链可变区基因

● 重链及轻链可变区基因克隆测序

● 生物信息学分析测序结果,剔除非功能抗体基因

● 得到抗体序列

 
 

杂交瘤测序优势:相较于直接对抗体进行基于蛋白质分析的测序相比,得益于基因测序技术的发展,杂交瘤测序可以提供更准确更可靠的结果,防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。

杂交瘤测序的应用:为申请保护性专利提供有权单抗序列信息永久保留单克隆抗体序列信息,防止杂交瘤细胞丢失单抗信息表达纯度更高的重组单克隆抗体缩短杂交瘤细胞克隆化耗时过程,加速单克隆抗体产生速度构建工程化抗体亲和力成熟,进一步提高单抗的亲和力构建嵌合抗体或人源化抗体。

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