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布鲁氏菌病（Brucellosis，也称布氏杆菌病，以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的常见传染病。我国将其列为二类动物疫病。 为了预防、控制和净化布病，依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关的法律法规，制定本规范。 1 适用范围 本规范规定了动物布病的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施、控制和净化标准。 本规范适用于中华人民共和国境内一切从事饲养、经营动物和生产、经营动物产品，以及从事动物防疫活动的单位和个人。 2 诊断 2.1 流行特点 多种动物和人对布鲁氏菌易感。 布鲁氏菌属的6个种和主要易感动物见下表： 布鲁氏菌属的6个种和主要易感动物见下表：
布鲁氏菌是一种细胞内寄生的病原菌，主要侵害动物的淋巴系统和生殖系统。病畜主要通过流产物、精液和乳汁排菌，污染环境。 羊、牛、猪的易感性最强。母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。带菌动物，尤其是病畜的流产胎儿、胎衣是主要传染源。消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、黏膜等感染。常呈地方性流行。 人主要通过皮肤、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌最为严重。猪种布鲁氏菌感染人较少见，犬种布鲁氏菌感染人罕见，绵羊附睾种布鲁氏菌、沙林鼠种布鲁氏菌基本不感染人。 2.2 临床症状 潜伏期一般为14～180天。 最显著症状是怀孕母畜发生流产，流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎，从阴道流出污秽不洁、恶臭的分泌物。新发病的畜群流产较多；老疫区畜群发生流产的较少，但发生子宫内膜炎、乳房炎、关节炎、胎衣滞留、久配不孕的较多。公畜往往发生睾丸炎、附睾炎或关节炎。 2.3 病理变化 主要病变为生殖器官的炎性坏死，脾、淋巴结、肝、肾等器官形成特征性肉芽肿（布病结节）。有的可见关节炎。 胎儿主要呈败血症病变，浆膜和黏膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性、出血性炎症。 2.4 实验室诊断 2.4.1 病原学诊断 2.4.1.1 显微镜检查 采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。 2.4.1.2 分离培养 新鲜病料可用胰蛋白月示 琼脂面或血液琼脂斜面、肝汤琼脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝汤琼脂斜面等培养基培养；若为陈旧病料或污染病料，可用选择性培养基培养。培养时，一份在普通条件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的环境中，37℃培养7～10天。然后进行菌落特征检查和单价特异性抗血清凝集试验。为使防治措施有更好的针对性，还需做种型鉴定。 如病料被污染或含菌极少时，可将病料用生理盐水稀释5～10倍，健康豚鼠腹腔内注射0.1～0.3mL/只。如果病料腐败时，可接种于豚鼠的股内侧皮下。接种后4～8周，将豚鼠扑杀，从肝、脾分离培养布鲁氏菌。 2.4.2 血清学诊断 2.4.2.1 虎红平板凝集试验（RBPT）（见GB/T 18646） 胎儿主要呈败血症病变，浆膜和黏膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性、出血性炎症。 2.4 实验室诊断 2.4.1 病原学诊断 2.4.1.1 显微镜检查 采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。 2.4.1.2 分离培养 新鲜病料可用胰蛋白月示 琼脂面或血液琼脂斜面、肝汤琼脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝汤琼脂斜面等培养基培养；若为陈旧病料或污染病料，可用选择性培养基培养。培养时，一份在普通条件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的环境中，37℃培养7～10天。然后进行菌落特征检查和单价特异性抗血清凝集试验。为使防治措施有更好的针对性，还需做种型鉴定。 如病料被污染或含菌极少时，可将病料用生理盐水稀释5～10倍，健康豚鼠腹腔内注射0.1～0.3mL/只。如果病料腐败时，可接种于豚鼠的股内侧皮下。接种后4～8周，将豚鼠扑杀，从肝、脾分离培养布鲁氏菌。 2.4.2 血清学诊断 2.4.2.1 虎红平板凝集试验（RBPT）（见GB/T 18646） 胎儿主要呈败血症病变，浆膜和黏膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性、出血性炎症。 2.4 实验室诊断 2.4.1 病原学诊断 2.4.1.1 显微镜检查 采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。 2.4.1.2 分离培养 新鲜病料可用胰蛋白月示 琼脂面或血液琼脂斜面、肝汤琼脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝汤琼脂斜面等培养基培养；若为陈旧病料或污染病料，可用选择性培养基培养。培养时，一份在普通条件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的环境中，37℃培养7～10天。然后进行菌落特征检查和单价特异性抗血清凝集试验。为使防治措施有更好的针对性，还需做种型鉴定。 如病料被污染或含菌极少时，可将病料用生理盐水稀释5～10倍，健康豚鼠腹腔内注射0.1～0.3mL/只。如果病料腐败时，可接种于豚鼠的股内侧皮下。接种后4～8周，将豚鼠扑杀，从肝、脾分离培养布鲁氏菌。 2.4.2 血清学诊断 2.4.2.1 虎红平板凝集试验（RBPT）（见GB/T 18646） 2.4.2.2 全乳环状试验(MRT)（见GB/T 18646） 2.4.2.3 试管凝集试验(SAT)（见GB/T 18646） 2.4.2.4 补体结合试验(CFT)（见GB/T 18646） 2.5 结果判定 县级以上动物防疫监督机构负责布病诊断结果的判定。 2.5.1 具有2.1、2.2和2.3时，判定为疑似疫情。 2.5.2 符合2.5.1，且2.4.1.1或2.4.1.2阳性时，判定为患病动物。 2.5.3 未免疫动物的结果判定如下： 2.5.3.1 2.4.2.1或2.4.2.2阳性时，判定为疑似患病动物。 2.5.3.2 2.4.1.2或2.4.2.3或2.4.2.4阳性时，判定为患病动物。 2.5.3.3 符合2.5.3.1但2.4.2.3或2.4.2.4阴性时，30天后应重新采样检测，2.4.2.1或2.4.2.3或2.4.2.4阳性的判定为患病动物。 布鲁氏菌病虎红平板凝集试验操作规程 1 范围 本标准规定了布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的操作技术要求 本标准适用于各种家畜布鲁氏菌病筛选试验。 2 试剂和材料 2.1试剂 2.1.1抗原和血清：按照说明书使用，使用前置室温（22℃~25℃）30min~60min，并充分摇匀。 2.2 材料 2.2.1 玻璃板：约45cm×30cm，要求洁净，划成32个方格，横数8个格，纵数4个格，每格4×4cm，每一格下再划1cm宽的小格，用于填写血清号。 2.2.2 牙签：扁形圆头或类似小棒。 2.2.3 移液器：能够吸取30 uL。 2.3 被检血清 2.3.1 按照常规方法采血分离血清。 血清必须新鲜，无明显蛋白凝固、无溶血和无腐败气味。 2.3.2运送和保存血清样品 防治血清冻结和受热，以免影响凝集价。试验前血清须置室温（22 ℃~25℃）30min~60min。 3操作方法 3.1将玻璃板上各格标上被检血清号，然后加入相应的被检血清30 uL。 3.2在被检血清上滴加30 uL虎红平板凝集抗原，使其相混合。轻微摇动，室温下4min内观察结果，同时作阴、阳血清对照。 3.3每次操作以不超过20份血清样品为宜，以免样品干燥而不易观察结果。 4结果判定 每份血清在规定时间内出现凝集反应者判为阳性，不出现凝集反应者判为阴性；其必须在阴性血清对照不出现凝集，阳性血清对照出现凝集时，试验成立，方可判定。 |
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