作者:王祖雄 美因深圳临床检验实验室生产专员 前言:每当别人问起我的工作,不是我感到尴尬就是对方感到尴尬,我的尴尬是不知道如何介绍我的工作(基因检测?PCR?DNA提取?)才能让对方通透,对方尴尬的是不管我如何介绍他都不懂。今天就让我来简单介绍一下基因检测的基底基础:DNA提取。 你或许很难想象一根口腔拭子、一份唾液、一管抗凝全血都经历了什么,最后以DNA的崭新形象出现在你面前。一份DNA的质量的优质程度总的来说是由实验前、实验中、实验后所决定。 01.实验前,指的是标本的采集、标本的保存、标本的运输。实验前的质量控制是整个基因检测后续运行的保障,其中一环出现问题都将影响后续实验的运行,甚至让实验无法进行。 02.实验中,指的是将合格样本的DNA提取出来的一系列操作。实验中质量控制是DNA提取的核心。目前提取DNA的方法繁多,物理方法(研磨法、玻璃珠法、超声波法),化学方法(碱裂解法、异硫氰酸胍法),生物方法(酶法)。 不管是什么方法其主要的原理其实大致相同, 都是先用蛋白酶和裂解液先把DNA释放出来,再用无水乙醇沉淀DNA,用载体吸附DNA,然后洗涤液洗涤,最后用溶解液溶解DNA。 DNA提取全程都要注意防止样品污染(环境与样品的污染和样品与样品的污染),这将关系到实验结果的可信度。 03.实验后,则是对DNA保存。DNA的保存是对PCR的完善,可以随时查找样本DNA进行DNA扩增。一般DNA提取出来后,内置DNA保存液,短期内使用将放置于4℃进行保存,长期保存将放置于-20℃下进行保存,减缓DNA降解速度。 常见的采样方法 目前基因检测普遍使用的采样方法有口腔拭子采样、唾液采样、血液采样,其中口腔拭子和唾液采样因无创、试用所有年龄层人群等优点得到普遍运用。 为什么会有些样本要重采? 我们经常会收到各类不合格的样本,其中最多的就是发霉的口腔拭子(口腔拭子需阴干后装入纸质信封中,以免口腔拭子发生霉变影响检测)和有杂质的唾液样本(唾液采样前应用清水漱口一到两次,半小时内不得进食)。这些不合格的样本会导致提取不到DNA,所以需要重采。 实验室收到有菜叶的样本 DNA样本如何保存?会变质吗? 说到样本保存,不得不提唾液采样了,唾液样本中的自然降解酶和细菌会破坏DNA的完整性,很快降低DNA的质量,所以唾液采集完要和唾液保存液充分混匀,常温下能保存一年左右。规范操作下的口腔拭子样本可以在干燥环境下保存2—3个月。 |
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