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有机阴离子转运多肽(OATP)1B1是重要的肝摄取转运蛋白,介导很多内源性物质和外源性药物转运到肝细胞。为了鉴别和研究天然产物中潜在的OATP1B1的调节剂,本实验采用稳定表达OATP1B1的中国仓鼠卵巢细胞(CHO),在96孔板中测定了21种常见天然化合物和提取物对OATP1B1介导荧光素甲氨蝶呤转运的影响。该方法可进一步应用于高通量筛选大化合物库。结果表明:若干黄酮类化合物(如槲皮素、槲皮苷、芦丁、菊花梗叶总黄酮和桑皮黄素等)和三萜类化合物(如甘草次酸和甘草酸等)在体外实验中显著抑制了OATP1B1的转运功能,其IC50值均小于16μM;黄酮类化合物比其对应的糖苷类化合物的抑制作用更强,而且糖的类型和糖链长度对其抑制作用均有影响。为了考察这些化合物对OATP1B1介导其他底物摄取的影响,我们建立了检测OATP1B1药物底物氟伐他汀和罗伐他汀的LC-MS/MS方法。研究结果表明,天然产物对OATP1B1转运功能的影响具有底物依赖性。本论文的研究结果将有助于预测和避免潜在的OATP1B1介导的不良药物-药物和药物-食物相互作用,为临床合理用药提供实验依据和指导。有机阴离子转运多肽2B1(OATP2B1)表达在胎盘、肝脏、乳腺、脑和肠等组织中,介导四溴酚酞磺酸钠、3-硫酸雌酮和3-硫酸脱氢表雄酮等的转运。糖基化是一种重要的蛋白翻译后修饰,OATPs的共有结构特征—潜在的N-糖基化位点位于胞外环2和5上。为探究OATP2B1上N-糖基化对其表达及功能的影响,我们首先使用生物信息学软件预测4个潜在N-糖基化位点,并该对应位点处的将天冬酰胺突变成谷氨酰胺,得到四个单突变(N146Q、N176Q、N350Q和N538Q)和一个双突变(N176/538Q)。然后对于这些OATP2B1突变体的功能和表达的评估实验在HEK293细胞中进行。结果表明:OATP2B1上的天冬酰胺176和538是糖基化位点。当这两个位点被分别突变时,均使得蛋白水平降低以及转运活性显著降低;当两个位点被同时突变时,蛋白水平显著下调,同时转运功能基本丧失。这表明N-糖基化对OATP2B1的功能和表达非常重要。…… 
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