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1、原发性肝癌现状 在全世界范围内，原发性肝癌（PHC）是威胁人类生命健康的第二大癌症死因。我国是肝癌高发国，每年有大约383000人死于肝癌，约占全世界肝癌死亡总数的51%。而这些人群中，绝大多数发现于中晚期，延误了早期治疗的绝佳时机。因而，肝癌发病的控制亟需更简单、高效、快速地筛查和早期诊断手段。 2、AFP与PHC 目前，PHC的筛查主要依赖于肝超声和成像造影。然而近年来，由于指标结果主观性更少，且比成像灵敏度更高，肿瘤标志物正引起越来越多的重视。在所有的血清标志物中，AFP是用于PHC检测最常用也是最可靠的标志物之一，几乎70%的PHC患者中都有AFP水平异常。 2.1 AFP的性质及其生理作用 AFP属于血清白蛋白家族，其编码基因位于4号染色体的长臂上。AFP最初产生于胎盘层和卵黄囊，在胚胎期，AFP及其他血清白蛋白家族在肝脏中表达，而与其他这些蛋白不同的是，在出生后几周内血清中的AFP浓度几乎完全丧失了表达且几乎不可检测得到（<10 ng/mL）。 AFP糖链异构体主要有3大类：AFP-L1、AFP-L2 和AFP-L3，它们与扁豆凝集素的亲和力不同，且在不同的生理或病理状态下各自的表达量也不同。在胚胎期和围产期，AFP的主要功能是保证各种分子（如重金属铜或镍、脂肪酸、胆红素及某些特定药物）的运输。此外，AFP由于具有免疫抑制作用，可防止母体对胎儿的排斥作用。 2.2 AFP用于PHC诊断 正常人血清中的AFP含量很低，AFP的血浆浓度20 ng/mL是人体的病理学阈值，而浓度达400 ng/mL以上时通常即被视为PHC诊断的可信因素。根据病理学特征的不同，包括肿瘤细胞的分化程度和肿瘤组织大小，AFP在PHC患者体内水平的升高程度不同。由于检测方法学的不断改进，目前AFP对PHC的阳性检测率已达90%以上。在排除活动性肝病、妊娠、胚胎瘤的情况下，一般认定血清AFP浓度＞400 ng/mL达4周，或＞200 ng/mL持续8周以上即被诊断为PHC。 肝癌病例中AFP的动态规律可以呈现为： 1、持续性升高； 2、由低到高持续升高； 3、先高后低，又复升高，呈马鞍形。 肝炎患者的肝功能恢复正常时，AFP却上升，提示因肝细胞修复新生所引起，是好转现象。但当SGTP恢复正常时，若AFP不降反而升高，应警惕发展为肝癌的风险。 在肝硬化等“慢活肝”中，AFP水平也常升高，但一般不超过400ng/ml。肝硬化时若AFP浓度＞400ng/ml，且HBSAg（+）者，应警惕肝癌发生的风险。 胚胎在16-21周时，AFP水平最高，可达1mg/ml，胎儿血通过胎盘与母体血相通，这就是孕妇AFP水平比正常人高的原因。然而，对于在各个阶段高出正常孕妇AFP水平的案例，也可伴肝癌、肝炎等其他引起AFP水平升高的因素。 2.3 AFP与癌症的发生 多项研究表明AFP可能与癌症的发生有关，这主要体现在AFP具有抗凋亡、促进细胞增殖，以及促肿瘤细胞的侵袭移动等作用。 2.4 AFP辅助预后评估 通过与传统的风险分级和评分系统结合，AFP还可作为有效的预后评价工具，对多种PHC治疗手段包括肝切除、肝移植、射频消融、经导管动脉栓塞术或系统治疗等进行预测。 由于AFP的半衰期仅为4天，通常切除后浓度很快就下降。对于AFP本底水平较高的肝癌患者，肿瘤切除后AFP回落至正常水平说明了手术的成功。相反，如果此时AFP未恢复至正常水平甚至进一步上升，则在早期阶段预示着转移或者复发的可能性。 对于进展期的PHC，常使用姑息疗法，AFP也可对此的疗效进行评估。临床研究表明，在索拉菲尼用药8周后，血清中AFP水平降低幅度大于20%时预示着较高的总体存活率，也有研究以降幅50%为响应值。 Chou等报道了在终末期的PHC患者进行奥沙利铂治疗中，AFP有很好的病程预测和预后评估作用。Chan等也很好的将AFP用于多柔吡星治疗的预后和疗效监控。 Keam等报道称AFP可很好的用于疾病控制的预测。Chan等研究发现，对于采用顺铂、白介素α-2b、5-氟尿嘧啶治疗的PHC患者，AFP可很好的进行预后和疗效监控。 Lin 等将AFP与GALNT14基因型联合，也取得了很好的预测效果。 3、AFP与其他疾病 3.1 AFP与其他肝病 在其他的急慢性肝炎、肝硬化等良性肝病中，也伴有AFP水平的升高，但通常在50-200 ng/ml之间，极少数也可达400ng/ml以上。但随着病情的好转，AFP会在短时间内降至正常水平，结合转氨酶等生化指标，可与肝癌做出区分。 3.2 AFP与胎儿神经管缺陷（NTD） AFP水平升高与NTD的发病密切相关。当胎儿患NTD时，由于脑组织或脊柱外露，羊水和母体血清中的AFP含量异常升高，可达800ng/ml以上，因此检测孕妇血清和养水中的AFP浓度成为胎儿NTD诊断的诊断依据。 3.3 AFP与其他恶性肿瘤 AFP除产生于胚胎期肝细胞中，也可由卵黄囊产生，此外在胃肠道粘膜中也有少量分泌。因此，在卵黄囊恶性肿瘤、原发性胃癌、胆管细胞癌、结肠癌等恶性肿瘤中，也可见AFP水平的升高。 3.4 此外，在其他疾病，如胆石症、浅表性胃炎及增生性骨关节病中，也可见血清AFP含量的升高。 4、指标检测方法学——化学发光免疫分析（CLIA）原理 化学发光免疫分析系统结合了化学发光法和免疫分析法系统，它同时兼具了化学发光法的高灵敏度和免疫分析的高特异性。该法将化学发光剂或酶直接结合到抗原或抗体上，加入待测物后，通过抗原-抗体免疫反应形成免疫复合物。免疫反应结束后，加入氧化物或酶的底物，化学发光物质在氧化剂或酶的作用下，会形成不稳定的中间态，通过释放光子回到基态，发光强度可被光学信号检测仪器检出。根据待测物浓度与发光信号标准曲线，可计算出待测物浓度。 鲁米诺类和吖啶酯类化学发光试剂是目前最常用的发光体系。鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物是最早用于CLIA的发光物质。在碱性环境下，鲁米诺通过辣根过氧化物酶（HRP）催化，可被H2O2氧化为成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体，回到基态后可释放出光子。经HRP标记的抗原或抗体在与待测物进行了一系列免疫反应后，加入发光底物鲁米诺，在H2O2+NaOH 作用下释放光子，光强依赖于免疫复合物中HRP浓度。鲁米诺反应体系中需加入碘苯酚或对苯基酚等作增强剂，否则发光为闪光型且信号弱。 在吖啶酯类发光体系中，标记了抗原或抗体的吖啶酯在碱性环境下，被H2O2离子进攻，形成不稳定的二氧乙烷，随后分解为CO2和激发态的N-甲基吖啶酮。与鲁米诺发光体系相比，该体系具有明显的优势。由于吖啶酯的发光效率大大高于鲁米诺，其直接作为标记物用于免疫反应，简单迅速，无需催化剂或信号增强剂，因而提高了信噪比，降低了干扰作用。 酸性磷酸酶（ALP）/1,2-二氧环乙烷体系以及电化学发光（ECL）体系也是具有高灵敏度的常用化学发光免疫分析体系。此外，近年来新发现的生物发光体系：荧光素/荧光素酶、无机氧化物体系等在药物分析等方面也有一定的研究与应用。 |
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