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HIV抗体ELISA检测试剂比较

 雨偌yu 2018-07-11



作者:怀化市第二人民医院  张廷华


HIV抗体检测分为筛查试验(包括初筛与复检)和确证试验。常见的筛查方法有:1、酶免法(ELISA);2、化学发光与免疫荧光法;3、快速检测法(多为金标法)。常见的确证方法包括免疫印迹法(WB)、条带免疫法、放射免疫沉淀法(RIPA)及免疫荧光法(IFA)等。


目前,国内HIV抗体检测筛查试验以酶免法(ELISA)最为常用,检测的标本可使用血液、唾液、尿液等。在国内,先后出现了四代ELISA检测试剂,现就四代ELISA检测试剂比较如下:


第一、二代ELISA检测试剂


ELISA第一、二代检测试剂基本相似,仅仅以出现的时间顺序分为第一代与第二代,现归为一类,这两代检测试剂出现时间早,原理使用的都是间接法,窗口期长。间接法为检测抗体最常用的方法,属非竞争性结合试验。其原理如下:固相Ag+待检Ab+酶标Ab结合为Ag-Ab-Ab-E复合物,加入底物后显色,根据显色深浅确定检测抗体含量的多少。间接法由于采用的酶标抗抗体仅针对一类免疫球蛋白分子,通常用的都是抗人IgG,严格地讲,所测的仅为抗体的IgG类,不涉及IgA和IgM。并且第一、二代检测试剂包被的固相抗原为病毒裂解产物,此类抗原不纯,所以以上几种原因导致了第一、二代检测试剂的局限性,为时代所淘汰。


第三代ELISA检测试剂


ELISA第三代检测试剂针对第一、二代试剂的不足,进行了改进。第三代采用的是双抗原夹心法,窗口期短。双抗原夹心法可检测各类抗体,包括IgG和IgM,IgM比IgG出现的时间更高,检测IgM更为有利缩短窗口期,第三代检测试剂包被的固相抗原比第一、二代试剂包被抗原纯化度更高,为人工合成式抗原,因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性高于间接法,缩短了HIV抗体检测的窗口期,为目前国内临床检测最为常用的试剂。双抗原夹心法原理为:固相Ag+待检Ab+酶标Ag结合为Ag-Ab-Ag-E复合物,加入底物后显色,根据显色深浅确定检测抗体含量的多少。


第四代ELISA检测试剂


第四代ELISA检测试剂为最新进展试剂,采用的为抗原抗体联合检测法,可同时检测血液中的HIV-P24抗原和HIV-1/2抗体,此抗体包含IgG和IgM,抗原抗体联合检测试剂中抗体检测采用双抗原夹心法,P24抗原检测采用双抗体ELISA夹心法,因此HIV检测窗口期更为缩短。


HIV筛查试验复检要求:对于初筛呈现阳性反应的标本,应使用原有试剂与另外一种不同原理(或厂家)的试剂,或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。针对第四代检测试剂需注意的是:若采用第四代检测试剂进行初筛试验时,则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应,而抗体试剂检测为阴性反应,则应考虑进行HIV-P24抗原或核酸检测,必要时要进行随访。


我们实验室遇到一例第四代试剂检测为阳性,确证试验WB检测为阴性的病例,病人对我们医院的检测结果提出了严重质疑。第四代检测试剂初筛为阳性时,送CDC确证试验为阴性,此原因为CDC采用的确证试验多为WB,而WB检测的为HIV抗体,而没有涉及到HIV-P24抗原,所以这种情况也是可能出现的。遇此情况,CDC反应需要定期进行随访,随访期间可根据需要,检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。


所以,以上情况,各位同仁们一定要注意各自实验室HIV初筛使用的试剂原理,为第几代检测试剂,只有多了解检测原理,并进行分析,在工作上才不会遇到意外的麻烦。


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