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艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV) 引起的一种传染病，目前中国艾滋病的感染呈蔓延和增加的趋势，谈“艾”色变早已成为大家对艾滋病的态度，因此如何早期发现和诊断HIV感染对预防HIV传播、控制AIDS的发展至关重要。 图1 HIV抗原抗体在机体表达过程示意图 目前国内外实验室多采用大批量样本筛查，实验室初筛选用灵敏度高、特异性稍低的试剂进行检测。为了尽可能避免假阴性结果出现和缩短窗口期，HIV血清学诊断试剂已经发展到了第四代，在诊断的敏感度和特异性两方面都有了巨大的进步，第四代试剂与前三代试剂相比，增加了对p24抗原的检测，缩短窗口期；初筛阳性的标本再用特异性强的方法进行确认。但灵敏度提高的同时假阳性率也随之增加，这样可能给实验室工作人员带来不便和受检者增加心理负担，因此，了解假阳性的产生原因和影响非常有必要。通过查阅大量文献总结影响假阳性原因有如下几个方面： 一、受检者自身因素 1. 自身免疫性疾病：如类风湿因子（RF）、系统性红斑狼疮（SLE）肾病综合征等。 类风湿因子（RF）是一种抗自身的IgG-Fc（Crystallization fraction；容易结晶化的区带）的抗体。其免疫球蛋白类型大多是IgM型。因此，有时与免疫反应试剂中所使用的抗体（用于抗原检测的动物IgG）发生反应后，呈现假阳性/假高值。 图2 RF非特异反应示意图 2.HAMA反应引起假阳性结果 如图3所示：存在HAMA时，除了正规的抗原抗体复合物之外，还形成HAMA介导的固态层抗体/标记抗体复合物，使结果变为假阳性或假高值。 图3 HAMA反应模式图 3. 用药情况 ①注射免疫球蛋白、②分子靶向治疗药物等。 4. 特殊人群 孕妇、新生儿、透析患者等。 以上这些影响因素可能会产生某些物质与试剂中的成分非特异结合，其血清样本进行检查时都容易出现有假阳性的结果。因此在临床检测HIV抗体时应清楚地了解被检测者的身体状况，尽量排除自身因素对检测结果的干扰。 二、实验室因素： 1.标本性状原因 (1)血清微纤维蛋白影响 a.采血时没有完全混匀或放置时间不够，导致血液不能充分凝固； b.离心条件和时间不够，导致纤维蛋白未分离。 图4 微纤维蛋白形成原因及解决办法 (2)严重溶血和脂血的标本：由于抽血困难导致溶血和高脂血的患者血液。 2.采血管原因 采血管的材质、添加物、血清分离剂等会对抗原抗体反应产生影响； 3.人为因素 操作错误，不能按照标准操作规程进行实验操作导致结果错误。 三、仪器、试剂的因素 1. 仪器因素 ①仪器检测过程中报警导致；②当天质控失控；③定标曲线不合格等因素都会检测出仪器未能正常运行，可能会影响血清检测结果。 2. 试剂因素 ①使用过期的试剂；②试剂储存的环境不合格；③试剂运输条件不合格；④试剂可能被污染、⑤试剂本身的高灵敏性等因素影响血清检测结果，包括试剂中抗体针对的抗原表位不同而引起的灵敏度不一样，例如HISCL与某公司的HIV试剂都是抗原抗体联合检测的试剂，但由于针对的抗原表位不同，可能出现结果不一致的情况，某公司试剂检测阴性，HISCL试剂检测为阳性，HISCL的结果相对于某公司的结果就是“假阳性”。 下面是我司HISCL与R公司用HIV血清盘进行HIV Ag+Ab试剂灵敏度评估数据： 选取10个不同血清盘，其中A-E为病人血清，F-J为HIV-1 Antigen Lysate，并通过对倍稀释得到。由下图可以看出，A-E为病人血清，HISCL-5000灵敏度稍高于R公司；F-J为HIV-1 Antigen Lysate 通过对倍稀释得到不同浓度。通过比较可以看出，由于HISCL-5000在检测抗原上使用了人源化抗体，因此灵敏度高于R公司。
注：A/B表示B个标本中检测出A个为阳性标本。 3. 试剂方法学 确认实验的特异性较高，在HIV感染初期“窗口期”，p24抗原大量出现，Symex HISCL所使用人源化抗体的HIV抗原抗体联合检测试剂，要比一般只检测抗体试剂灵敏度高，能够更早筛查出HIV阳性标本，但由于p24抗体未出现，所以确诊实验有可能为“不确定”或“阴性”，导致人们认为初筛为”假阳性”。 根据上述分析针对可能会引起HIV抗体初筛试验中出现假阳性结果的原因，提出一些相应的处理措施。具体包括以下几点： 1）严格遵守制度规范 对初筛试验呈阳性反应的样品用原有试剂和不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阳性反应, 或一阴一阳, 需送艾滋病确认实验室确认，要求所有的工作人员严格按照制度进行操作，认真对待工作中的每一个细节，保证高效率地完成检测工作，执行保密工作，保护受检者的隐私，避免对其造成心理压力。 2）正确使用诊断试剂和仪器 ①筛查工作中所使用的试剂必须是符合国家食品药品监督管理局中的标准，尽量使用灵敏度高、特异性好的试剂，使用有效期之内的试剂，保证试剂存储与运输条件合格，以降低由试剂的原因造成假阳性结果的比率； ②选择质量好的仪器，必须要验证仪器的性能。 3）减少操作过程中的失误 ①采血时达到足够血量避免溶血，拒收严重的溶血和脂血标本，严格按标准操作规程进行充分温预和离心，避免纤维蛋白干扰导致结果假阳性。为确保凝固，采血后全面贯彻反转混合5次以上，温浴30min，离心2000g、10min。 ②需要检查仪器运行情况，检查仪器质控和定标情况是否良好； ③提高操作人员的专业操作技能、分析问题的能力以及责任心。 4）需要临床沟通 首先和临床医生沟通，询问患者基本情况：主诉、病史、临床症状以及用药情况，综合判断是否有其他因素干扰检测结果。 5）确证实验 a.HIV初筛阳性的患者，需按照流程进行复检，并充分考虑可能导致检测结果假阳性的因素，做出相应的处理措施； b.在临床检测HIV抗体时应清楚地了解被检测者的身体状况，尽量排除自身因素对检测结果的干扰； c.怀疑标本问题时，使用同种方法复检时应将标本混匀二次离心后再进行复检或重新抽血进行复检； d.对于复检结果和初检不一致者，可建议采用HIV RNA进行复检； 以上情况最终必须送往CDC进行确诊实验。 【案例分析】 案例一： 某医院患者男性48岁，由于出现车祸故障，需要急诊手术，医生加做了传染病术前四项筛查，结果如下：
针对以上结果项目出现弱阳性，首先进行标本形状和仪器质控检查，标本没有明显蛋白丝但比较浑浊，质控良好，经过和老师沟通过程中得知，由于标本没有完全凝固进行离心，使用3500转小离心机离心（白天使用3500转大离心机），建议使用大离心机重新离心10min后进行检测，结果如下：
以上案例分析影响结果弱阳性出现原因为：标本性状原因，血清微纤维蛋白影响 ① 标本放置时间不够，导致血液不能充分凝固； ② 离心条件和时间不够，导致纤维蛋白未分离。 案例二： 某医院患者在门诊皮肤科诊疗，医生建议筛查TP与HIV，Sysmex HISCL结果HIV阳性，酶法阴性重新复查仍为阴性，送往CDC确认结果不确定，建议4-7周复查，但病人后期再没有到该院就诊，后来得知该患者在其他医院复查确诊HIV阳性。HISCL所使用HIV抗原抗体联合检测人源化抗体试剂，要比一般只检测抗体试剂灵敏度高，能够更早筛查出HIV阳性标本，但由于HIV早期p24抗原出现的时候，抗体还未出现，所以确诊实验有可能为“不确定”或“阴性”，人们认为初筛为”假阳性”。 以上案例分析Sysmex HISCL所使用人源化抗体的HIV抗原抗体联合检测试剂，要比一般只检测抗体试剂灵敏度高，能够更早筛查出HIV阳性标本，这种标本一定要进行确诊实验确认，如果不确定，一定要建议隔期复查，这样可以避免HIV漏诊。 【小结】 综上所述,虽然HIV抗体初筛检测过程中假阳性有多方面原因，因此在临床应用中应根据实际情况具体分析，这样需要试验人员不断加强业务知识和提高操作技能，能够对我们的结果能够做出准确的解释至关重要。但是由于目前的技术水平，一般实验室为初筛实验室，一定要减少假阴性出现，不能漏诊，可以允许适当的假阳性出现，出现时我们和临床医生一起跟患者做好沟通解释工作。 艾滋病防治工作任重而道远, 实验室筛查工作应该更加严格控制质量、规范操作规程, Sysmex追求在保证不漏检的情况下, 提高阳性结果的准确率，值得您的信赖！ 【参考文献】 [1] 张晓红,张倩,周学红等. 雅培化学发光法在 HIV 筛查试验中假阳性分析. 标记免疫分析与临床[J]. 2013,2 (20):43-45. [2] 王明珠, 路玮,姜桂娥. HIV抗体初筛试验假阳性原因分析及处理. 中国卫生检验杂志[J].2008,12(18): 2803-2804. [3] 顾春瑜,刘英丽,王海滨等. 第四代HIV诊断试剂检测HIV抗体假阳性原囚分析.武警医学. 2013,9(24):758-790. [4] 李德武. HIV抗体初筛试验假阳性原因探究及处理措施.检验医学与临床[J]. 2012.10(9):2492-2493. [5] 全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版). |
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