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Western blot（WB）是个神奇的实验，无数仁人志士为之如痴如醉。许多小伙伴常说，这次某蛋白又没“跑出来”，实际“跑”胶这个过程是不会出太大问题的，当曝光结果不满意时，除了改进中间的操作步骤（例如转膜、封闭、洗膜等），更重要的是检查蛋白样品或抗体本身是不是有问题。
选择合适的抗体其实是WB实验最为关键的一步，抗体选不好，既有可能无法显现条带极大地浪费时间，又有可能出现误导整个实验方向的结果。可以毫不夸张的说，您的WB实验的命运在您购买抗体的时候就已经被决定了。因此，强烈建议，对于关键的蛋白一定要买大品牌商家的抗体，或者国内口碑比较好的商家的抗体。而例如内参、AKT这种生产工艺相对比较成熟的抗体，则可选用知品牌名度一般的抗体。
大家都有自己的一套选购抗体的方法，主要有两种方式。1.查阅文献，从文章中获取抗体的厂家信息；2.直接在口碑比较好的商家官网查询，并辅以丁香园、小木虫等论坛的口碑来选择。然而这是一个非常耗时耗力的过程。 现在给大家推荐一款在线选购抗体的神器——Labome，他主要为国内的小伙伴们解决这么几个问题：1）遇到不常见的抗体时可以快速查询市面上哪些厂家有卖你想要的抗体；2）对比各家公司的抗体产品。 进入后界面如下。这是一款集合了全球各大知名生物试剂公司抗体/ELISA、siRNA/shRNA、生化试剂等产品的第三方查询网站，相当于一款搜索引擎。 我们再搜索框中随便输入一个Akt，点击submit，搜索结果见下图。显示出了Akt的抗体、ELISA、siRNA/shRNA、Akt的激活剂和抑制剂。右侧栏还有物种选择 这里我们只点击 Akt Antibody，其余的功能就有待小伙伴们自己发掘了，进入后界面如下（截取一部分） 第一栏显示厂家的名称，货号等，点击抗体名称AKT后出现该抗体的详细界面 小伙伴们可通过Reference搜索相关参考文献，看这个抗体在别人实验中的效果怎么样。 图3的第二栏显示适用的实验如WBIHC IP等，其中重要的一个点就是citations的数量，被文献引用的次数越多的抗体一般是质量还差不多的抗体，可以重点关注；第三栏是价格和包装以及厂家商品的链接；第四栏的camera的图标可以显示出WB或IHC染色的示例图片。Filter这一栏主要是进一步筛选的，例如厂家、反应物种、单克隆/多克隆、宿主物种、抗体标记（HRP等）、实验用途（WB、Elisa等）。 这里我们注意到搜索出来的Akt是包含总Akt和磷酸化Akt的，此时如果我们点击Filter一栏的phosphorylated，界面如下，出现的就都是磷酸化的Akt了。 还有一个功能就是compare功能，随便勾选几个抗体，点击compare，界面如下，会出现不同抗体的各方面对比，还是很方便的。 好了今天就策到这里，Labome网址是https://www./index.html 温馨提示：百度labome可能会出来一个叫“来邦网”的网站，据我们研究这两个网站不是同一家，勿掉坑。 |
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