一种提高非洲菊根腐病抗性的方法与流程

背景技术：

非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）是世界五大鲜切花之一属多年生宿根草本花卉。其花色繁多，花枝挺拔，花期长且不易衰败，深受花卉种植者和消费者喜爱，具有极高的经济价值。近年来，随着种植面积的不断扩增，非洲菊病害尤其是根腐病日益严重，已成为制约我国非洲菊产业健康发展的重要难题。

印度梨形孢宿主范围广、对其宿主植物具有广泛的促进生长和增强植物对生物和非生物胁迫抗性的作用。将印度梨形孢接种至非洲菊根系，利用印度梨形孢对植物的有益作用有可能是提高非洲菊根腐病抗性的有效方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提高非洲菊根腐病抗性的方法，进而解决生产上非洲菊根腐病带来的问题。

本发明的技术方案：

一种提高非洲菊根腐病抗病性的方法，其中包括印度梨形孢发酵液的制备，非洲菊组培苗的移栽，隐地疫霉发酵液的制备，隐地疫霉接种及发病情况观察。其特征在于，通过接种印度梨形孢提高非洲菊的根腐病抗性。本发明步骤简单、可操作性强、效果显著。

具体方法为：

（1）印度梨形孢发酵液的制备

从保存在非洲菊组培苗生根培养基中的印度梨形孢菌落边缘挑取直径为5 mm的菌块2块，置于PDA液体培养基内，在28℃，120 r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，加水稀释获得孢子浓度为5×105个/ml的印度梨形孢发酵液；

（2）印度梨形孢接种及非洲菊组培苗的移栽

将生根良好的非洲菊组培苗开盖炼苗2天后，洗净根系，在印度梨形孢发酵液中浸泡2 h，之后移栽至基质中；

（3）隐地疫霉发酵液的制备

活化隐地疫霉菌株，然后挑取菌落边缘的气生菌丝接种于PDA固体培养基上；于28℃培养箱内暗培养5 d，挑取菌落边缘直径为5 mm的菌块2-3块于PDA液体培养基内，在温度为28℃，转速为120 r/min的摇床内培养2天，加水稀释获得孢子浓度为2×105个/ml的隐地疫霉发酵液；

（4）隐地疫霉接种及发病情况观察

将移栽1个月的接种印度梨形孢的非洲菊幼苗用刀片伤根后浸泡于隐地疫霉发酵液中2小时，取出后移栽至装有腐殖质的花盆中，置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1500±200lx，光照时间为12 h/d，接种第2天开始观察植株的发病情况，以未接种印度梨形孢的非洲菊幼苗作为对照。

本发明具有以下优点：

1、本发明所用印度梨形孢保存于活体植株生根培养基中，对宿主的定殖能力更强。

2、本发明可以显著提高非洲菊根腐病抗性，具有较高的应用和经济价值。

3、本发明操作简单，可行性强。

附图说明

图1 印度梨形孢对非洲菊根腐病抗性的影响.A：接种了印度梨形孢的非洲菊；B：未接种印度梨形孢的非洲菊。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明并不仅限于此。

实施例1

1、印度梨形孢发酵液的制备

从保存在非洲菊组培苗生根培养基中的印度梨形孢菌落边缘挑取直径约为5 mm的菌块2块，置于装有100 ml灭菌的PDA液体培养基的250 ml三角瓶内，在28℃，120 r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，加水稀释获得孢子浓度为5×105个/ml的印度梨形孢发酵液；

2、印度梨形孢接种及非洲菊组培苗的移栽

将生根良好的‘玲珑’非洲菊组培苗开盖炼苗2天后，洗净根系，在印度梨形孢发酵液中浸泡2 h，之后移栽至基质中；

3、隐地疫霉发酵液的制备

活化隐地疫霉菌株，然后挑取菌落边缘菌丝接种于PDA固体培养基上；于28℃培养箱内暗培养5 d，挑取菌落边缘直径为5 mm的菌块3块于装有100 ml灭菌的PDA液体培养基的250 ml 三角瓶内，在温度为28℃，转速为120 r/min的摇床内培养2天，加水稀释获得孢子浓度为2×105个/ml的隐地疫霉发酵液；

4、隐地疫霉接种及发病情况观察

将移栽1个月的接种印度梨形孢的‘玲珑’非洲菊幼苗用刀片伤根后浸泡于隐地疫霉发酵液中2小时，取出后移栽至装有腐殖质的花盆中，置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1500±200lx，光照时间为12 h/d，接种第2天开始观察植株的发病情况。以未接种印度梨形孢的‘玲珑’非洲菊幼苗作为对照。

隐地疫霉侵染6天后，使用印度梨形孢发酵液处理的‘玲珑’非洲菊生长良好（图1A），而对照组‘玲珑’非洲菊第2天开始出现轻微失水，于第6天时，叶片失水严重，根部腐烂脱落，植株萎蔫而死（图1B）。

因此可以看出：印度梨形孢可以提高非洲菊根腐病的抗病性。

本发明利用浸根法获得有印度梨形孢定殖的非洲菊，显著提高非洲菊根腐病抗病性，对于非洲菊生产意义重大，具有较高的应用和经济价值。