 为什么要做细胞划痕实验？ 细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央 区域划线，去除中央部分的细胞，然后再继续培养细胞至实验设定的时间，然后取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。 实验步骤： 将所需的材料进行灭菌，包括直尺和marker笔 1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2、在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。 3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。 4、PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5、放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。 细胞划痕实验注意事项： 1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。 2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<> 3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。 划痕法测量迁移的不足之处 适用的细胞范围小，一般只能适用于上皮细胞、纤维样细胞划痕法的不足也很明显，适用的细胞系很窄，一般只能用于上皮，纤维样细胞系。因为： （1）这些细胞本身有迁移能力，且较强； （2）细胞有极性，方便测量，观察； （3）细胞对无血清有较强的忍受力（至少24h），因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的。 |
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