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王氏，宜春侯王咸的女儿。她的曾祖父王诉曾官至丞相。
汉成帝绥和元年（癸丑，公元前8年），大司马王根辞官后，王莽当上了大司马。虚情假意的他装出一幅恭俭有礼的样子，欺世盗名。还要他的夫人王氏所着装束和奴仆一样简朴，以给他赢得好名声。不料，王莽在大司马的位子上仅坐了一年多，就被赶下台来。王夫人也随同王莽迁居到“新都国”。令王氏伤感的是，二儿子王获不知何事动怒杀了一名家奴，王莽知道后便借此事来增加自己的声誉。逼得王获偿命自杀而死。不久，公卿大臣纷纷上书汉哀帝，要求重新起用不念私情的王莽。汉哀帝迫于压力，以侍奉太皇太后的名义召王莽回京师长安。
汉哀帝元寿二年（庚寅，公元前1年），汉哀帝驾崩，年仅9岁的中山王刘衎继承王位，是为汉平帝。王莽以大司马的身份执掌国政。
汉平帝元始元年（辛酉，公元1年），王氏被封为‘安汉公夫人’。
汉平帝元始四年（甲子，公元4年），王莽将女儿嫁给汉平帝做皇后。此后，令王夫人悲愤的事接连不断。王氏共生有四个儿子，其长子王宇因看不惯王莽专权，不让年幼的平帝见其母卫氏。王宇的老师吴章出计：“你的父亲十分相信鬼神，我们把血洒在府门上，就说不让卫氏入京，触怒了上苍。”于是，王宇安排妻子的哥哥吕宽去办理此事。谁知事情败露，王莽一怒之下，将王宇及其怀有身孕的妻子吕嫣打入死牢。后来王宇在牢中饮药自杀，其妻因怀着孩子而被释放。长孙王宗和孙女王妨也先后被逼自杀。王夫人既哭儿子又哭孙儿孙女，竟把一双眼睛给哭瞎了，更因过度悲伤，患上重病卧床不起。当她还没从悲痛中挣脱出来，王莽又将汉平帝鸩杀，另令两岁的刘婴为帝，自己做起“摄皇帝”来，至使年仅15岁的女儿成了寡妇。无可奈何的王夫人只有每日以泪洗面。
王莽始初元年（戊辰，公元8年），王莽废刘婴而自立为帝，并定国号为‘新’。
王莽始建国元年（己巳，公元9年）正月初一，王夫人被册封为新朝皇后，其小儿子王临被立为太子。皇后的凤冠并没有给王氏带来欢乐和荣耀，并且悲剧还再继续。王夫人有一婢女，名叫原碧，口齿伶俐，善解人意，很得王夫人的信任。王莽见原碧姿色动人，于是和她有了私情。王临也常到王夫人处问安，虽然此时王临已娶了刘歆的女儿为妻，但见了原碧禁不住垂涎三尺。但原碧已被王莽召幸，如今又与太子有私，所以原碧每想到这就会露出不快的情绪。王临发觉后再三追问，才得知她和父王的那段隐情，但此时王临、原碧二人已经难分难舍，为了长享欢娱，他竟想到要阴谋弑父；于是两人计划等王莽再来王夫人处所时，便在茶中下毒，毒死王莽。
王莽地皇二年（辛巳，公元21年）正月，王皇后病逝。王莽说为了让她能够更好的服伺太皇太后王政君，就将她葬在了王政君的墓旁，陵号“亿年”，并尊她为‘孝睦皇后’。
王皇后死后不久，太子王临的阴谋被王莽获知，火冒三丈的王莽当即下令笞死原碧，而后逼王临自杀身亡。
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