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细胞粘附实验

 老学究ev2fmzu9 2019-03-26

Cell Adhesion:细胞周期调控的 细胞黏附机制 

2018-06-30 21:15

看点:揭示了细胞黏附的调节是通过细胞周期依赖性调控的分子机制。

关键词:

CDK1:细胞周期蛋白依赖性激酶-1,与细胞周期蛋白结合时,Cdk1磷酸化导致细胞周期进展。

EDU:5-Ethynyl-2'-deoxyuridine,一种胸腺嘧啶类似物,与分裂细胞的DNA结合。EdU用于检测细胞培养中的DNA合成,以及检测在胚胎、新生儿和成年动物中进行DNA合成的细胞。

Wee1:一种核苷酸激酶,属于蛋白质激酶Ser/Thr家族的一种蛋白激酶。它的分子质量为96 kDa,是细胞周期进展的关键调控因子。它通过抑制Cdk1来抑制细胞进入有丝分裂,从而影响细胞的大小。

Paxillin:一种蛋白,是在非横纹肌细胞的黏着斑和横纹肌细胞的科系中表达,并作用于细胞外基质上。

CylinB1:一种调节有丝分裂的调节蛋白,其中的一种转录本是细胞周期的G2/M阶段主要表达的细胞周期调控转录本。

stress fibers:应力纤维,在细胞收缩中发挥重要作用,为细胞黏附,迁移和形态发生等许多功能提供力。

结论:非同步化培养细胞的黏附区域的变化取决于细胞周期阶段。

A:EDU标记的 非同步化细胞的免疫荧光图像,然后对Paxillin蛋白和CylinB1蛋白进行染色。

G1期细胞:为EDU和细胞周期蛋白B1阴性

S期细胞:为EDU阳性

G2期细胞:为细胞周期蛋白B1阳性

B:图A的数据分析柱状图展示;G1,S和G2期的异步细胞中的粘附复合物的定量。

结果:黏附在EDU阳性的细胞(S期)的复合区域明显增多,CylinB1阳性细胞(G2)降低了黏附复合区域。

C:细胞周期调节细胞黏附的模型示意图。

  • 初始的细胞周期蛋白CylinA2-CDK1依赖性黏着斑面积增加。

  • S期的应力纤维的形成增加。

  • 在G2期中,通过CDK1和CylinB1相互作用结合来抑制CDK1的表达,并且通过Wee1的磷酸化修饰导致黏着斑区域和应力纤维的减少。

  • 随后CylinB1-CDK1活化,进入有丝分裂(M期)和有丝分裂细胞变圆后残余的黏着斑被分解。

结果:细胞黏着斑区域面积随着细胞周期的变化而变化。

材料来源:JCB: ournal of cell biology 2018

Cell adhesion is regulated by CDK1 during the cell cycle

Fig5. Adhesion area in asynchronous cells varies depending on cell cycle phase.

细胞黏附机制图:

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