|
1.如何真正有效的杀死支原体？
当我们在养细胞的时候，有可能会出现如下的状况：细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点。
如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染等原因，而仍有上述一种或几种情况，则高度提示：细胞可能出现了支原体污染。据报道，细胞培养中发生支原体污染的机率较高，会达到70%左右，常规抗生素的使用对支原体几乎无效。
那么，支原体污染，对细胞培养有什么危害呢？
支原体是最小的自我复制的微生物，直径0.2~2μm ，没有刚性细胞壁，可通过滤膜，对抗生素不敏感；细胞培养时支原体污染没有混浊，PH 变化及细胞病理变化不显著，没有明显可见的污染迹。但是支原体污染能改变被培养细胞的生长特点、细胞膜组成以及DNA ，RNA及蛋白表达等；导致不准确或者错误的实验结果；造成珍贵培养细胞的损失；浪费人力、物力及时间。
MP公司的支原体去除试剂MRA属于抗生素喹啉家族的衍生物，它通过抑制DNA促旋酶清除支原体污染，该酶是微生物DNA复制过程中必不可少的酶类。
该产品特点：
1，超强抑制支原体活性，彻底去除污染：抑制DNA促旋酶（抑制DNA复制）清除支原体污染
2，活性范围广：各支原体株系均可作用
3，工作浓度低，无细胞毒性：在推荐浓度下使用MRA，细胞毒性极小，因此也可以作为预防支原体污染使用的试剂。
4，消除支原体污染后永不复发：一旦使用了MRA，培养细胞就不会再受到同样的支原体污染。
5，使用方便：将支原体去除试剂加入污染培养物（工作浓度0.5ug/ml，孵育7天）即可彻底消除支原体污染；也可用于支原体的预防，预防浓度0.1ug/ml。
详情见官网链接：http://www./product.php?pid=0930500
2.细胞培养级中酚红的作用？
酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素).为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。在固醇类激素的研究和生产中应该选择无酚红培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
3.谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，如没有谷胺酰胺细胞生长不良而发生细胞死亡。脱掉氨基后，可作为能量来源、参与蛋白质合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺是一种并不稳定的氨基酸，在中性水溶液中会自发降解（4℃冰箱内放置2周,大部分谷氨酰胺被破坏)；导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
因此，出现了一种谷氨酰胺的替代物，HiGlutaXL是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。
HiGlutaXL™二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，HiGlutaXL™二肽溶液有极少的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。由于稳定性增加，因此无需反复添加，使用更方便； 可以防止L-谷氨酰胺降解产生有毒性氨的累积，因而有利于细胞生长。
4.培养级中丙酮酸钠的作用？
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
5.培养细胞时应使用5 %或10% CO2？
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为3.7 g/L时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为1.5g/L时，则应使用5% CO2培养细胞。
|
