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蛋白酶调节无数的生理过程，但蛋白酶底物的鉴定是一个挑战。其中，双肽肽酶(DPPs)通过识别并切割底物氨基末端脯氨酸后的二肽来调控激素、细胞因子和神经肽。由于技术上的挑战，许多DPP底物仍然未知，比如：①完整和切割后的DPP底物大小相似，通常不能通过凝胶电泳分离，因此利用尺寸差异的凝胶基平台不能用于DPP的表征；②DDP识别其底物的游离N端，这限制了蛋白酶消化前涉及N端底物修饰的方法的实用性；③基于质谱(MS)的蛋白质组/N端组学分析，由于没有合适的富集手段，低丰度肽通常很难检测。 然而，2015年发表在Nature Chemical Biology上用2-吡啶羧醛进行蛋白质N端选择性修饰的文章(DOI: 10.1038/nchembio.1792)给作者带来了灵感。2PCA与N端氨基缩合形成亚胺，然后与肽链中的下一个具有亲核性的N环化形成稳定的5元环。可以预想到，所有的N末端都可以实现稳定的标记，除了那些具有倒数第二个脯氨酸氨基末端由于无法成环而不被标记。值得一提的是，赖氨酸氨基不能被2PCA稳定地修饰，因为它们缺乏邻近的酰胺基进行环化。 在这里，作者利用2PCA的这种独特反应活性来标记被切割后的DPP底物。并在DPP已知的几种底物中进行了验证。利用这个被称为蛋白酶底物化学富集(CHOPS)的平台，他们证明了抑制Nlrp1炎症小体的酶DPP8和DPP9不能直接切割Nlrp1b。 尽管CHOPS对DPP底物分析特别有用，但这个方法理论上也能够适用于基于质谱N端组学分析，它与大多数感兴趣的蛋白酶都是相容的。
本文作者：WQW |
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