 关键词：ddPCR、PrimePCR assay、PD-L1、检查点抑制剂、黑素瘤、非小细胞肺癌、外泌体 背景介绍 肿瘤的免疫治疗是一个很广的概念，目前最有效的两种方案可能分别是免疫检查点抑制剂和CAR-T细胞治疗。 PD-1抑制剂，即为一种免疫检查点抑制剂，包括PD-1抗体和PD-L1抗体（例如已经获NMPA批准的可用于相应适应症的两种抗体药: O药Opdivo——Nivolumab, 纳武利尤单抗，即为PD-1抗体和K药Keytruda ——Pembrolizumab, 帕博利珠单抗，即为PD-L1抗体）。 许多肿瘤和肿瘤浸润免疫细胞表达高水平的PD-L1，而PD-L1与T细胞表面的同源配体PD-1相互作用，抑制T细胞的功能，使其表型发生改变；抑制T细胞增殖，减少细胞因子分泌，阻碍T细胞对肿瘤细胞的识别，帮助肿瘤逃脱免疫系统的追杀。 PD-1抑制剂则可以阻断PD-1和PD-L1之间的相互作用，解除T细胞活性受抑制状态，促进活化T细胞对肿瘤细胞的攻击，能实质改善多种肿瘤的临床结果。 PD-L1在肿瘤组织中的表达水平被广泛用于筛选可接受PD-1/PD-L1抗体治疗的病人，但目前仍然缺乏可关联PD-L1表达水平与疗效的数据，这是因为多种因素可能影响PD-L1的表达。外泌体是一种分泌型膜泡，参与细胞间物质和信息的转导，与人类的正常生理活动以及疾病的发生紧密相关。血液中的外泌体携带重要的细胞信息，是潜在生物标志物重要来源。 意大利的研究人员开展了一项研究，收集了接受O药和K药治疗的黑色素瘤（n=18）和NSCLC（n=8）病人在治疗开始前和用药2月后的血液样本，并通过QX200 ddPCR定量分析病人血浆样本中外泌体内PD-L1 mRNA的表达量，以期建立PD-L1 mRNA表达量和病人疗效之间的关系。 每个病人被抽取了6 mL血样品（EDTA采血管），2小时之内于1900g下离心10min，外泌体的提取使用凯杰 exoRNeasy提取试剂盒。PD-L1 mRNA的表达水平分析在Bio-Rad ddPCR上完成，使用了Bio-Rad 一步法RT-ddPCR试剂和CD274（PD-L1）PrimePCR ddPCR Expression 探针法检测试剂，并选择β-actin 作为内参（Prime ddPCR assay）。每个样本在ddPCR上重复三次。检测结果以成对t-test和t-test进行统计学分析，显著性水平设定为5%。  图1. NSCLC和黑色素瘤病人接受免疫检查点抑制剂治疗前后，血样中外泌体PD-L1表达和临床反应。深色为治疗期，浅色为治疗2月后的PD-L1平均水平（拷贝/毫升）。按照RECIST (v. 1.1) 标准定义CR：Complete response, PR：Partial response, SD：disease stabilization， PD：disease progression。 如图1所示，CR和PR的病人，治疗前后PD-L1平均表达水平显著下降（治疗前830.4±231.3拷贝/毫升 vs 治疗2月后242.5±82.5拷贝/毫升，P=0.016）；SD的病人治疗前后PD-L1平均水平差异不显著（治疗前298.8±97.2拷贝/毫升vs 治疗2月后247.5±29.8拷贝/毫升，P=0.586）；而出新PD的病人，治疗前后PD-L1平均水平出现显著上升（治疗前204.0±68.8拷贝/毫升 vs 治疗2月后416.0±87.8拷贝/毫升， P=0.001）。并且在治疗前的基线期，CR和PR的病人平均血浆PD-L1水平显著高于SD和PD的病人（830.4±231.3拷贝/毫升 vs 231.1±55.7拷贝/毫升, P=0.012;）。   图2. 两例代表性NSCLC患者治疗前后的PD-L1表达数据，A为PR，B为PD。 图2反映了两例代表性的NSCLC病人在接受免疫检查点抑制剂治疗后影像学变化以及对应的PD-L1血浆水平根据疾病反应或进展而变化。 开发预测疗效的生物标志物，以进一步实现获益人群的筛选和疗效的评估，是实现肿瘤免疫检查点抑制剂一线治疗的关键，也是实现精准免疫治疗的必由之路。本研究首次报道免疫检查点抑制剂治疗的病人血浆外泌体PD-L1表达水平的变化，并通过小样本临床样本初步说明，基于ddPCR开展血浆中外泌体PD-L1表达水平的动态监测是可行的，可以为免疫检查点抑制剂治疗的反应评估提供重要信息，也为预测疗效的生物标志物开发提供一个思路。 参考文献 1. British Journal of Cancer (2018), 1–5 | doi: 10.1038/bjc.2018.9 订购信息 更有PD-1基因表达研究assay可提供哦： 本产品仅限科研使用，不作为临床诊断。 Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。 这是一个广告 |
|
|
